Amplite 荧光法醛类定量试剂盒

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产品优势

1.可在100 µL检测体系中检测低至0.1纳摩尔（1 µM）的醛类物质

2. 兼容96孔或384孔微孔板检测

3.无需分离步骤，便于自动化操作

 

适用范围

用于醛类定量

 

产品介绍

近年来，细胞膜脂质过氧化产生的醛类物质在生成机制、反应活性及毒性作用等方面的研究备受关注。快速精准的醛类检测对生物研究、化学分析、食品工业及环境监测具有重要意义。目前市场上可用于醛类定量的试剂或检测试剂盒较为有限，现有检测方法大多基于高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）或气相色谱-质谱联用（GC-MS）等繁琐且昂贵的分离技术。

Amplite®比色法醛类定量试剂盒（10051）与Amplite®荧光法醛类定量试剂盒（10052）均适用于碱性条件下的醛类检测。其中10052试剂盒采用专用荧光染料，该染料与醛类反应后可生成强荧光产物，其检测灵敏度显著优于10051试剂盒。该荧光检测试剂盒采用灵敏的"混合即读"检测方法，可在100 µL检测体系中检测低至0.1纳摩尔（1 µM）的醛类物质，支持96孔或384孔微孔板检测形式，无需分离步骤即可轻松实现自动化操作，检测信号可直接通过荧光酶标仪读取。

 

注意事项

若样品中含有巯基化合物，需在加入AldeLight™ Blue前：向所有样品（包括对照）中加入2-5 mM H2O2，处理30分钟以消除巯基干扰 。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	365nm
Em：	435nm
cutoff:	420nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

标准操作流程

简要概述

1.准备醛类标准品/测试样品（50 μL）

2.加入AldeLight™ Blue工作液（50 μL）

3.室温（RT）孵育≥30分钟

4.加入25 μL反应缓冲液

5.监测荧光强度变化（激发/发射波长=365/435 nm）

 

储备液配制

（注：所有未使用的储备液应分装为单次用量，配制后于-20°C保存，避免反复冻融）

AldeLight™ Blue储备液（250X）：

向AldeLight™ Blue（组分A）瓶中加入40 μL DMSO（组分E），配制成250X储备液。

醛类标准品溶液（10 mM）：

向醛类标准品（组分D）瓶中加入1 mL双蒸水（ddH2O），配制成10 mM标准溶液。

标准品梯度稀释

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/10052

 

操作步骤：

1.取10 mM醛类标准品溶液，用双蒸水进行1:10稀释，获得1000 μM标准溶液（AS7）；

2.继续按1:3梯度稀释，依次获得AS6至AS1系列标准品溶液。

 

工作液配制

取5 mL检测缓冲液（组分B），加入20 μL 250X AldeLight™ Blue储备液，混匀即得工作液。

注意事项：

1.  5 mL工作液可满足一块微孔板检测需求；

2. 工作液稳定性较差，建议配制后2小时内使用。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品（AS1  -  AS7,1至1000μM）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（1至1000μM）
BL	50ul	ddH2O
TS	50ul	测试样品

1.按照表1和表2的布局要求，分别准备：醛类标准品（AS）、空白对照（BL）、测试样品（TS），384孔板每孔加样量调整为25 µL

2.含巯基样品预处理（可选步骤）

 若样品中含有巯基化合物，需在加入AldeLight™ Blue前：向所有样品（包括对照）中加入2-5 mM H2O2，处理30分钟以消除巯基干扰 。

3.在醛标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeLight Blue工作溶液，使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLAldeLight Blue工作溶液，总体积为50μL/孔。

4.将反应混合物在室温避光孵育15至30分钟。

5.每孔加入25μL反应缓冲液（组分C）。

6.使用荧光板读数器监测Ex / Em = 365 / 435nm处的荧光强度。