Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒 绿色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
1.能在100 µL反应体系中检测低至1pmol（10⁻¹²mol）的半胱氨酸或谷胱甘肽（GSH）
2.兼容96孔或384孔微孔板检测
3.无需分离步骤，可直接适配自动化系统
适用范围
用于检测谷胱甘肽
产品介绍
当细胞暴露于升高的氧化应激水平时，氧化型谷胱甘肽（GSSG）会积累，导致GSH/GSSG比值下降。谷胱甘肽还原酶通过同时氧化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），将GSSG循环还原为GSH。监测GSH/GSSG比值并定量生物样本中的GSSG，对于评估细胞和组织在谷胱甘肽抗氧化及自由基损伤保护作用下的氧化还原和解毒状态至关重要。目前市场上虽有多种生物体系硫醇定量试剂或检测试剂盒，但商业试剂盒普遍存在灵敏度不足或操作流程繁琐的问题。
Amplite®快速荧光法GSH/GSSG比值检测试剂盒（货号#10060）提供了一种超灵敏的GSH定量方案。该试剂盒采用专用水溶性非荧光染料，其与硫醇反应后可产生强荧光信号，通过一步荧光法即可在100 µL检测体系中灵敏检测低至1pmol的半胱氨酸或GSH。本检测体系兼容96孔板或384孔板微孔板格式，无需分离步骤即可轻松实现自动化操作，使用荧光酶标仪即可便捷读取信号。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490nm |
| Em： | 525nm |
| cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
标准操作流程
流程概述
1.准备GSH标准品（50 µL）
2.加入GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50 µL）
3.室温孵育10至60分钟
4.监监测在激发/发射 = 490/525 nm（截止波长 = 515 nm）处荧光强度
储备液配制方法
除非另有说明，所有未使用的储备液均应分装为单次使用量，配制后保存于-20°C，避免反复冻融。
GSH标准溶液（1 mM）
向GSH标准品（组分C）瓶中加入200 µL测定缓冲液（组分B），配制成1 mM（1 nmol/µL）的GSH标准溶液。
GSSG标准溶液（1 mM）
向GSSG标准品（组分F）瓶中加入200 µL双蒸水（ddH₂O），配制成1 mM（1 nmol/µL）的GSSG标准溶液。
Thiolite™ Green520WS储备液（100X）
向Thiolite™ Green520WS（组分A）瓶中加入100 µL DMSO（组分D），配制成100X Thiolite™ Green520WS储备液。
注：避光保存
标准溶液配制方法
推荐使用连续稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/10056
GSH或GSSG标准曲线制备
GSH标准曲线（0-10 μM）
1.取10μL GSH标准储备液加入990 μL测定缓冲液（组分B），配制10 μM GSH标准溶液（GSH7）。
2.以10 μM GSH标准溶液为起始浓度，进行1:2倍比稀释，依次获得5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.1563 μM的梯度浓度标准品（GSH6-GSH1）。
注：稀释后的GSH标准溶液不稳定，需在4小时内使用。
GSSG标准曲线（0-5 μM）
1.取10μL GSSG标准储备液加入990 μL测定缓冲液（组分B），配制10 μM GSSG标准溶液。
2.以10 μM GSSG标准溶液为起始浓度，进行1:2倍比稀释，依次获得5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563和0.0781 μM的梯度浓度标准品（GSSG7-GSSG1）。
注：稀释后的GSSG标准溶液不稳定，需在4小时内使用。
工作液配制方法
GSH工作液（GSH-WS）配制
取100 μL 100X Thiolite™ Green520WS储备液加入10 mL测定缓冲液（组分B）中，涡旋混匀。
注意：1.本工作液（GSH-WS）可满足两个96孔板检测需求
2.该溶液室温不稳定，需在2小时内使用完毕
3.注意避光保存
替代方案： 可按比例将100X Thiolite™ Green储备液与测定缓冲液混合配制
总GSH工作液（TGSH-WS）配制
取5 mL GSH-WS加入GSSG探针（组分E）瓶中，涡旋混匀。
注意：1.本工作液（TGSH-WS）可满足一个96孔板检测需求
2.该溶液室温不稳定，需在2小时内使用完毕并避光保存
替代方案：
可先配制25X GSSG探针储备液：向组分E瓶中加入200 μL双蒸水，再按比例将该储备液与GSH-WS混合配制TGSH-WS
样品示例
表1. 黑色96孔板中GSH标准品、GSSG标准品及测试样品分布
| Panel A | Pannel B | ||||||
| BL | BL | TS | TS | BL | BL | TS | TS |
| GSH1 | GSH1 | ... | ... | GSSG1 | GSSG1 | ... | ... |
| GSH2 | GSH2 | ... | ... | GSSG2 | GSSG2 | ... | ... |
| GSH3 | GSH3 | GSSG3 | GSSG3 | ||||
| GSH4 | GSH4 | GSSG4 | GSSG4 | ||||
| GSH5 | GSH5 | GSSG5 | GSSG5 | ||||
| GSH6 | GSH6 | GSSG6 | GSSG6 | ||||
| GSH7 | GSH7 | GSSG7 | GSSG7 | ||||
| Well | Volume | Reagent |
| GSH | 50 µL | Serial Dilutions (0.15 to 10 µM) |
| GSSG | 50 µL | Serial Dilutions (0.08 to 5 µM) |
| BL | 50 µL | Assay Buffer |
| TS | 50 µL | Test Sample |
再按比例
1.按照表1和表2提供的布局配制谷胱甘肽（GSH）标准品（GSH）、空白对照（BL）和测试样本（TS）。若使用384孔板，每孔试剂用量为25 µL（96孔板每孔50 µL）。
2.向GSH标准品、空白对照及测试样本的每孔中加入50 µL GSH-WS工作液，使总体检测体积达到100 µL/孔。若使用384孔板，则加入25 µL，总体积为50 µL/孔。
3.如需检测总谷胱甘肽（含还原型和氧化态），需配制TGSH-WS工作液和GSSG标准品。按表1和表2布局加入GSSG标准品（GSSG）、空白对照（BL）及测试样本（TS），384孔板每孔使用25 µL试剂（96孔板50 µL）。随后向各孔加入50 µL TSGH-WS工作液，使总体积达100 µL/孔（384孔板为50 µL/孔）。
4.室温避光孵育10至60分钟。
5.使用荧光酶标仪监测荧光强度变化，检测条件为：激发波长/发射波长 = 490 nm/525 nm（截止波长 = 515 nm）。
