抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 420
货号1105存储条件F/L
规格2 Labelings价格1740
Ex (nm)398Em (nm)411
分子量溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

      ReadiLink mFluor 420 蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的最便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。 试剂盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亚胺酯(SE)显示出与蛋白质的脂族胺的良好反应性和选择性,并形成羧酰胺键,其与天然肽键相同且稳定。 iFluor 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色,荧光原位杂交,流式细胞术和其他生物学应用。 每个ReadiLink 抗体标记试剂盒都提供了进行两次偶联反应(2x50μg蛋白质)的所有必需成分。 每个试剂盒可用于标记50-100μg单克隆,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa),只需两个简单的混合步骤。抗体标记试剂盒ReadiLink mFluor 420是美国AAT Bioquest研发的产品。



产品说明书

标准操作规程(标记50μg蛋白质)

      将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心,并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。

 

1.准备蛋白质溶液(溶液A):

为了标记50g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将5L(总反应体积的10%)的反应缓冲液(组分B)与50L目标蛋白质溶液混合。

注1.如果您的蛋白质浓度不同,请相应调整蛋白质体积,使~50μg蛋白质可用于标记反应。

注2:为了标记100g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将10μL(总反应体积的10%)反应缓冲液(组分B)与100μL目标蛋白质溶液混合。

注3:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用Amicon Ultra-0.5,Ultracel-10膜,10 kDa(来自Millipore的cat#UFC501008)去除游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)广泛用于蛋白质沉淀。

注4:用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。

注5:如果蛋白质浓度小于1 mg / mL,则结合效率显着降低。为获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。

 

2.运行结合反应:

2.1将蛋白质溶液(溶液A)加入一瓶标记染料(组分A)中,通过反复移液几次将其混合均匀,或将小瓶涡旋几秒钟。

注意:使用标记染料的两个小瓶(组分A)通过将100μg蛋白质分成2x50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。

2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意:如果需要,可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

 

3.停止共轭反应:

3.1添加5 L(对于50μg蛋白质)或10L(对于100μg蛋白质),其为TQ染色猝灭缓冲液(组分C)的总反应体积的10%到缀合反应混合物中(来自步骤2.2),将它们混合 好。

3.2在室温下孵育10分钟。

3.3标记的蛋白质(抗体)现在可以使用了。

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153--0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425--E436

 

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说明书
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 420.pdf