Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 红色荧光

货号11552存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格500 Tests价格2544
Ex (nm)571Em (nm)584
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒,过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小,因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比,过氧化酶也更便宜;其主要缺点是在保护剂(例如叠氮化钠)存在的条件下溶解性低;而在低浓度下,过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA(酶联免疫吸附实验)、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue,我们的超灵敏HRP显色底物,即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物,它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物(例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue)具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质,在664nm处有最大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA,酶促反应动力学分析,氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过最优化处理,并且可用于高通量液体处理设备。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 576 ± 5 nm
推荐孔板: 透明底板
荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 575nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液(50μL)
2.添加HRP标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液(100X):
将250μLDMSO(组分E)加入到Amplite 红色过氧化物酶底物(组分A)的小瓶中以制备100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。 应立即使用原液,避光。

2. HRP标准溶液(20 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分C)加入到辣根过氧化物酶(组分D)的小瓶中以制备20U / mL的HRP标准溶液。

3. H2O2储备溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2储备溶液。 注意:稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL分析缓冲液(组分C)中加入1μL的20U / mL HRP标准溶液,得到10mU / mL HRP标准溶液(SD7)。 取10 mU / mL HRP标准溶液(SD7)并进行1:3连续稀释,得到连续稀释的HRP标准品(SD6-SD1)和分析缓冲液(组分C)。

 

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H2O2储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液(组分C)中以制备HRP工作溶液,避光。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品(SD1-SD7,0.01至10 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
SD1 SD1 ... ...
SD2 SD2 ... ...
SD3 SD3    
SD4 SD4    
SD5 SD5    
SD6 SD6    
SD7 SD7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
SD1-SD7 50ul 连续稀释液(0.01至10 mU / mL)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。注意:高水平的HRP(例如,> 100mU / mL终浓度)可能由于Amplite TM Red(至非荧光)的过度氧化而导致荧光信号降低。

2.向HRP标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液,使总HRP测定体积为100μL/孔。对于384孔板,在每个孔中加入25μLHRP工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟,避光。

4.用荧光板读数器在激发= 540±10nm,发射= 590±10nm(最佳Ex / Em = 540 / 590nm,截止= 575nm)监测荧光增加。注意:也可以将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。

 

参考文献

Identification of acetylcholinesterase inhibitors using homogenous cell-based assays in quantitative high-throughput screening platforms
Authors: Shuaizhang Li, Ruili Huang, Samuel Solomon, Yitong Liu, Bin Zhao, Michael F Santillo, Menghang Xia
Journal: Biotechnology journal (2017): 1600715

 

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说明书
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 红色荧光 .pdf