D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7
Ex (nm) | 385 | Em (nm) | 529 |
分子量 | 302.3 | 溶剂 | Water |
存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
现货
产品优势
水溶性和稳定性好
适用范围
用于萤光素酶基因检测、活体成像以及ATP定量检测
产品介绍
萤光素是最常用且用途最广泛的生物发光底物。萤火虫(Photinus pyralis)及多种其他甲虫体内存在萤火虫萤光素酶/萤光素生物发光体系。萤光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP激活的萤光素。萤火虫萤光素酶通过ATP依赖性氧化反应产生560 nm波长的化学发光,该发光信号在数秒内达到峰值——当萤光素和ATP过量时,光输出强度与萤光素酶活性成正比。
萤光素酶长期被偶联至抗体,作为免疫检测中的标记物,并以萤光素作为检测底物。与辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶相比,萤光素酶对化学修饰的耐受性较低。该酶的一个显著优势是哺乳动物组织中内源性萤光素酶活性极低,且具有高检测灵敏度。
另一重要应用领域是卫生监测。萤光素酶/萤光素体系可通过检测ATP来指示污染情况,因为所有生物体中存在的ATP是产生发光的必要条件。此类ATP生物发光技术主要应用于食品加工厂的表面检测,通过质量保证程序判断设备或产品是否存在污染。
注意事项
1.一般活体用DPBS,避免渗透压影响。体外细胞一般用无菌水,避免盐粒子影响信号通路级联反应,尤其是钙信号。
2.该产品用DPBS溶解后,如果需要保存,请调整如下浓度及pH保存:100 mM, pH ~6.5, -20℃避光。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。 如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。
3.Luc的Ex/Em及其他相关内容链接:Spectral properties of luciferin and EGFP. A: Normalized excitation and... | Download Scientific Diagram (researchgate.net)
操作方法
以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子,它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。
用于体外生物发光图像测定的实施方案
1在无菌水中制备100mM(100-200X)荧光素原液。混合均匀。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免反复冻融。
2.在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。
3.从培养细胞中分离培养基。
4.将荧光素工作溶液加入细胞中,并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。
用于体内生物发光图像测定的实施方案
1.在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液,不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。
2.过滤器通过0.2μm过滤器过滤溶液。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免反复冻融。
3.在动物体重150mg / kg(或10μL/ g荧光素储备溶液)成像前10-15分钟腹膜内(i.p.)注射荧光素。
注意:应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究,以确定峰值信号时间。
荧光素报告分析分子测定的实施方案
1.在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免反复冻融。
2.制备1mM D-荧光素的工作溶液,其中含有3mM ATP,1mM DTT和15mM MgSO4的25mM tricine缓冲液,pH7.8。
3.将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。
4.根据制造商的说明,使用荧光素工作溶液对光度计进行预调。
5.注入200μl荧光素工作溶液,无延迟,10秒积分时间。
注:积分时间(integration time)是指在光学测量中,仪器收集光信号并累积的时间长度。这个时间越长,仪器能够收集到的光信号就越多,从而提高测量的灵敏度和准确性。在荧光素实验中,10秒的积分时间意味着仪器在这10秒内不断收集并累积光信号,然后将其用于分析。
试剂应用文献
Authors: Chen, Rui and Kang, Ziqin and Li, Wenhao and Xu, Tianshu and Wang, Yongqiang and Jiang, Qiming and Wang, Yuepeng and Huang, Zixian and Xu, Xiaoding and Huang, Zhiquan
Journal: Journal of Extracellular Vesicles (2024): e12490
Authors: Hoekstra, Marieke MB and Ness, Natalie and Badia-Soteras, Aina and Brancaccio, Marco
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2024): e2316646121