Buccutite 蛋白交联试剂盒 标记100ug抗体

货号1315存储条件 Multiple
规格2 Labelings价格3840
Ex (nm)Em (nm)
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Buccutite 蛋白交联 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的最便捷方法。蛋白质 - 蛋白质缀合通常用双功能接头如SMCC进行。 SMCC的一端(通过NHS酯)与氨基酸赖氨酸和N-末端中发现的胺(-NH2)反应,另一端(通过马来酰亚胺)与氨基酸中发现的硫醇基团(-SH)反应。半胱氨酸。然而,SMCC修饰的蛋白质极不稳定并且通常是自身反应性的,因为蛋白质通常含有胺和硫醇基团,其引起显着量的均聚交联。此外,量化蛋白质上马来酰亚胺基团的数量是相当困难和繁琐的。 AAT Bioquest开发了一种方便有效的交联方法,将两种生物分子连接起来,具有高结合率。我们的方法使用一对交联剂:Buccutite MTA和Buccutite FOL。将MTA添加到一种蛋白质中,而将FOL添加到另一种蛋白质中。通过混合Protein-1-Buccutite MTA和Protein-2-Buccutite TM FOL引发蛋白质 - 蛋白质交联反应。这种交联反应在非常温和的中性条件下进行,不需要任何催化剂,并且它坚固且有效。Buccutite 蛋白交联抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。



产品说明书

实验方案

操作步骤

1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA(组分B)的小瓶中,并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意:如果需要,抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

 

2.准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化

2.1将提供的旋转柱(组分D)反转几次以重新悬浮沉降的凝胶并除去任何气泡。

2.2取下尖端并将色谱柱放入洗涤管(2 mL,未提供)中。取下盖子,让多余的填料缓冲液通过重力排放到凝胶床的顶部。如果色谱柱没有开始流动,请将盖子推回色谱柱并再次将其取出以开始流动。丢弃排出的缓冲液,然后将色谱柱放回洗涤管中。但是,如果将色谱柱放入12 x 75 mm试管(未提供)中,请立即离心。

2.3在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟(参见“离心注意事项”部分)以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

2.4向柱中加入1-2 mL 1X PBS(pH 7.2-7.4)。每次施用PBS后,让缓冲液通过重力排出,或将柱离心2分钟以除去缓冲液。丢弃收集管中的缓冲液。重复此过程3-4次。

2.5在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟(参见“离心注意事项”部分)以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

 

3.纯化抗体-Buccutite MTA溶液

3.1将柱(来自步骤准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化)置于干净的收集管(1.5mL,未提供)中。 小心地将样品(~105μL,来自Step Antibody-Buccutite MTA反应)直接加载到色谱柱中心。

3.2加载样品后,加入5μL1XPBS(pH 7.2-7.4),使总体积为110μL。 将柱以1,000xg离心5-6分钟,并收集含有所需抗体-Buccutite MTA溶液的溶液。

 

4.制备抗体-PE缀合物

4.1通过向Buccutite FOL活化的PE(组分A)的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液,通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

4.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液(来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液)中,充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

4.3抗体-PE结合物现在可以使用了。 注意:立即使用时,抗体-PE结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意:对于长期储存,需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

 

5.抗体-PE共轭物的储存

抗体缀合物应在载体抗体(例如0.1%牛血清白蛋白)存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时,抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存,可以将抗体-PE缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

 

6.离心注意事项

6.1旋转柱(组分D)可以装入2mL微量离心管或12×75mm试管中,用于在离心过程中收集样品。 使用2 mL微管和色谱柱进行初始色谱柱平衡步骤。

6.2能够产生1,000 x g的最小力的摆动式离心机适用于Bio-Spin柱。 在特定转速下产生的重力是微量离心机转子半径的函数。 有关从每分钟转数(RPM)到离心力或g力的转换信息,请参阅摆动式离心机说明手册。 或者,使用以下等式计算达到1,000 x g重力所需的RPM速度。

6.3RCF(xg)=(1.12 x 10-5)×(RPM)×2×r(RCF是相对离心力,r是从转子中心到Bio-Spin柱中间测量的以厘米为单位的半径 ,RPM是转子的速度)。



说明书
Buccutite 蛋白交联试剂盒 标记100ug抗体.pdf