胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物Ac-LEHD-AMC 蓝 CAS 292633-16-0

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产品简介

Caspase 9属于半胱天冬酶家族的CED-3亚族，这类半胱氨酸蛋白酶在细胞凋亡的执行阶段起关键作用。该类酶具有显着的底物特异性，可特异性切割天冬氨酸残基后的肽键。"起始" caspase（如caspase 8）能够激活"效应" caspase（如caspase 3和7），随后效应caspase通过切割细胞底物，最终引发细胞凋亡的形态学变化。

Ac-LEHD-AMC是caspase 9的选择性荧光底物。其经caspase 9水解后可释放AMC荧光基团，该基团的检测使用~365 nm激发波长和~450 nm发射波长。本检测可在以下缓冲体系中进行：50 mM MES（pH 6.5）、10% PEG 8000、0.1% CHAPS、5 mM DTT及1 mM EDTA。

重要提示

请务必储存在低于-15°C的温度下，并置于阴凉避光处。

自收到之日起12个月内使用。

样品实验方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：

50uL原液

100uL DTT（1M）

400uL EDTA（100 mM）

10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。