胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物(Ac-LEHD)2-R110 绿

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产品简介

Caspase 9属于半胱天冬酶家族的CED-3亚族，这类半胱氨酸蛋白酶在细胞凋亡的执行阶段起关键作用。该类酶具有显着的底物特异性，可特异性切割天冬氨酸残基后的肽键。"起始" caspase（如caspase 8）能够激活"效应" caspase（如caspase 3和7），随后效应caspase通过切割细胞底物，最终引发细胞凋亡的形态学变化。

(Ac-LHED)₂-R110是caspase 9的选择性荧光底物。其经caspase 9水解后可释放R110荧光基团，该基团的检测使用~490 nm激发波长和~520 nm发射波长。本检测可在以下缓冲体系中进行：50 mM MES（pH 6.5）、10% PEG 8000、0.1% CHAPS、5 mM DTT及1 mM EDTA。

样品实验方案

下述实验方案仅提供基本指导，需根据具体实验需求进行优化调整。

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分装成单次用量冻存管，配制后保存于-20℃环境，避免反复冻融。

(Ac-LEHD)₂-R110储备溶液（10 mM）：

 使用DMSO溶剂配制10 mM 浓度储备溶液。

工作液配制

取50 μL底物储备溶液液，与100 μL DTT（1 M）、400 μL EDTA（100 mM）及10 mL Tris缓冲液（20 mM, pH=7.4）混合，配制50 μM caspase底物检测溶液（2X）。

实验方案示例

将等体积的 caspase 标准品/样品与2X检测反应溶液混合，室温避光孵育至少1小时。

于激发波长 498 nm/发射波长 525 nm处监测荧光强度变化。