胱天蛋白酶Caspase 8荧光底物(Ac-IETD)2-R110 绿

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产品简介

由于高纯度的罗丹明 110（R110）衍生底物以内酯构型存在，因此它们呈无色且无荧光特性。半胱天冬酶（caspases）对 R110 肽类底物的切割会生成强荧光性的罗丹明 110（R110），该产物可通过荧光法检测：以 488 nm 光激发（这是荧光仪器中最常用的激发光源），在 510-530 nm 波长下检测荧光信号。

(Ac-IETD)2-R110 荧光底物可能是目前广泛应用于荧光法检测各类半胱天冬酶活性的最灵敏指示剂。本研究中所用的(Ac-IETD)2-R110荧光底物对半胱天冬酶 8（caspase 8）具有特异性。此外，我们的 R110 类底物经过高度纯化处理，能够去除痕量的游离 R110（这类游离 R110 无法通过高效液相色谱法（HPLC）检测到，但会导致检测实验中产生显著的背景信号）。

重要提示

请务必储存在低于-15°C的温度下，并置于阴凉避光处。

自收到之日起12个月内使用。

样品实验方案

下述实验方案仅提供基本指导，需根据具体实验需求进行优化调整。

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分装成单次用量冻存管，配制后保存于-20℃环境，避免反复冻融。

(Ac-IETD)₂-R110储备溶液（10 mM）：

取 1 mg (Ac-IETD)₂-R110 粉末，加入 75 µL DMSO 溶液，配制为 10 mM 浓度储备溶液。

工作液配制

caspase 8检测溶液（2X）：

取50 µL (Ac-IETD)₂-R110 储备溶液（10 mM）、100 µL DTT（1 M）、400 µL EDTA（100 mM）与 10 mL Tris 缓冲液（20 mM, pH=7.4）混合均匀。

实验方案示例

将等体积的caspase 8标准品/样品与2X检测反应溶液混合，室温避光孵育至少1小时。

于激发波长 490 nm/发射波长 525 nm处监测荧光强度变化。