胱天蛋白酶Caspase抑制剂 FAM-VAD-FMK
| Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 517 |
| 分子量 | 691.66 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
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产品介绍
FAM-VAD是一种绿色荧光细胞渗透性多胱天蛋白酶抑制剂，可靶向胱天蛋白酶1、2、3、6、8、9或10。该抑制剂进入细胞后，会与活性胱天蛋白酶共价结合并产生绿色荧光。
当将FAM-VAD-FMK探针加入细胞群体时，该探针能进入每个细胞，与活性胱天蛋白酶异源二聚体大亚基上的反应性半胱氨酸残基共价结合，从而抑制酶的进一步活性。结合后的标记试剂会保留在细胞内，而未结合的试剂则会扩散到细胞外并被洗涤清除。绿色荧光信号直接反映了添加试剂时细胞内活性胱天蛋白酶的含量。含有结合标记试剂的细胞可通过96孔板荧光测定法、荧光显微镜或流式细胞术进行分析。该试剂适用于人类、啮齿类及果蝇等多种细胞系。
重要提示：本品需在 <-15°C 条件下储存，并应存放于阴凉、避光处。
本实验方案仅为指导方针，需根据您的具体需求进行调整。
本品自收到之日起有效期 12 个月。
样品实验方案
一、使用 AMC、AFC、pNA、R110 及 ProRed 底物的通用溶液胱天蛋白酶（Caspase）检测
1.用DMSO配制 10 mM 的储备液。
2.按以下比例配制 2X 的胱天蛋白酶底物（50 µM）检测液：50 µL 底物储备液、100 µL 二硫苏糖醇（DTT，1M）、400 µL 乙二胺四乙酸（EDTA，100 mM）、10 mL 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris Buffer，20 mM），pH=7.4。
3.将等体积的胱天蛋白酶标准品或样品与 2X 胱天蛋白酶底物检测液混合，在室温下孵育≥ 1 小时。
4.使用荧光酶标仪检测荧光强度，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。
1.用 DMSO 配制 2-5 mM 的储备液。
2.按实验需求处理细胞。
3.用含20 mM Hepes的Hanks缓冲液（HHBS）稀释DMSO储备液，配制2X渗透性胱天蛋白酶底物（20 µM）检测工作液
4.将等体积处理后的细胞与2X底物检测工作液混合，置于37°C、5% CO2培养箱中孵育≥1小时
5用 HHBS 清洗细胞至少 1 次。
6使用流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪检测荧光强度。
1.向试剂瓶中加入 50 µL DMSO，配制 250X的储备液。
注：货号（Cat#）13484，需向试剂瓶中加入 200 µL DMSO，配制 250X的储备液。
2.按实验需求处理细胞。
3.按照 1:250比例将250X DMSO储备液加入细胞悬液（例如：2 µL储备液加入500 µL细胞），置于37°C、5% CO2培养箱中孵育1小时
4.用 HHBS 清洗细胞≥1 次。
5.使用流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪检测荧光强度。
