胱天蛋白酶Caspase抑制剂mFluor 510-VAD-FMK

产品货期

咨询

产品介绍

FAM-VAD是一种绿色荧光细胞穿透性多胱天冬酶抑制剂，可靶向作用于caspase 1、2、3、6、8、9或10。该抑制剂进入细胞后，会与活性caspase共价结合并产生绿色荧光。

当将FAM-VAD-FMK探针加入细胞群体时，其可进入每个细胞并与活性caspase异源二聚体大亚基上的反应性半胱氨酸残基共价结合，从而抑制酶活性。结合态的标记试剂会保留在细胞内，而未结合的试剂则会扩散出细胞并被洗脱。绿色荧光信号可直接反映试剂添加时细胞内活性caspase的含量。含有结合标记试剂的细胞可通过96孔板荧光检测、荧光显微镜或流式细胞术进行分析。该探针的光谱特性与BD Horizon™ V500相似，因此可方便地使用BD Horizon™ V500滤光片组进行流式细胞术或显微镜检测。本品特别适用于配备紫色激光的流式细胞仪进行多色caspase检测。

重要提示

请务必储存在低于-15°C的温度下，并置于阴凉避光处。

自收到之日起12个月内使用。

样品操作及分析

以下协议仅提供指导，应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合，并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光，或使用酶标仪监测吸光度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液（HHBS）在Hanks中稀释DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X渗透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合（来自步骤2.3），并在37°C，5％CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定（仅适用于＃13470-13476）

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1：250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中（例如2 µL至500 µL细胞），并将细胞在37°C，5％CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。