Amplite 比色法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光

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适用范围

用于检测caspase-3/7活性。

产品介绍

Caspase在细胞凋亡和信号转导过程中起着关键作用。Caspase 3/7（CPP32/apopain）的激活是启动凋亡程序的重要环节，该蛋白酶已被确定为药物筛选靶点。Caspase抑制剂具有抗癌及其他药理应用潜力。研究证实Caspase 3/7对肽序列天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸（DEVD）具有底物选择性。

Amplite®比色法Caspase 3/7检测试剂盒黄色荧光采用(Z-DEVD)2R110作为显色指示剂：未酶解的R110肽底物呈无色状态，经caspase切割后会产生可被490-520 nm波长检测的R110染料。该黄色染料的吸光度增长值与caspase活性成正比。本试剂盒可通过酶标仪连续监测细胞裂解液和纯化酶制剂中caspase 3/7的活性，其检测灵敏度显著高于使用DEVD-pNA肽的其他商业试剂盒。

适用仪器

操作方法

方案概要

制备含测试化合物的细胞（96孔板每孔100 µL或384孔板每孔25 µL）

加入等体积的Caspase 3/7工作液（96孔板每孔100 µL或384孔板每孔25 µL）

室温孵育1-2小时

监测490 nm处吸光度值

细胞制备

有关细胞样本制备的指南，请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

工作液配制

将50 μL 200X Caspase 3/7底物储备液（组分A）加入10 mL检测缓冲液（组分B）中，充分混匀制成Caspase 3/7工作液。

注：该Caspase 3/7工作液可满足100次检测（按每次检测反应体积100 μL计算）。开启管盖前请短暂离心使储备液汇集于管底。

实验操作流程

1.向细胞中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）（化合物溶于PBS或所需缓冲液中）。空白孔（无细胞的培养基）中加入相应体积的化合物缓冲液。

2.将细胞培养板置于孵箱中处理特定时间以诱导细胞凋亡。

注：我们使用十字孢碱（SS）处理Jurkat细胞4小时（37°C）以诱导细胞凋亡，详见图1。

3.加入100 µL/孔（96孔板）或25 µL/孔（384孔板）Caspase 3/7工作液。

4.避光条件下室温孵育至少1小时。

5.关闭离心机制动功能，800 rpm离心2分钟。

6.使用酶标仪监测OD = 490nm波长处吸光度值的变化。