Amplite 荧光法组蛋白去乙酰化酶HDAC活性检测试剂盒 绿色荧光

货号13601存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格200 Tests价格2604
Ex (nm)493Em (nm)520
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Amplite 荧光法组蛋白去乙酰化酶HDAC活性检测试剂盒 绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测HDAC的试剂盒,组蛋白去乙酰化酶(HDAC)是一类从组蛋白上的ε-N-乙酰基赖氨酸氨基酸中除去乙酰基的酶。去乙酰化恢复赖氨酸氨基酸的正电荷,这增加了组蛋白对DNA的带负电荷的磷酸骨架的亲和力。该过程通常通过阻断转录因子的进入来下调DNA转录。正在研究HDAC抑制剂作为癌症的治疗方法。

我们的Amplite 荧光HDAC活性检测试剂盒为检测HDAC活性提供了一种快速,方便,灵敏的方法。该试剂盒使用我们的非肽HDAC Green 底物,它比基于肽的HDAC底物(如Ac-RGK(Ac)-R110,Ac-RGK(Ac)-AMC和Ac-RGK(Ac) - 更敏感 - AFC。此外,HDAC Green 底物也比其他商业肽基HDAC底物更耐蛋白酶水解。我们的试剂盒可用于测量细胞裂解液中的HDAC活性或用细胞提取物或纯化酶筛选HDAC抑制剂。HDAC Green 底物的长波长发射使得该测定不受化合物和细胞组分的干扰。用490nm的激发和525nm的发射监测HDAC活性。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法组蛋白去乙酰化酶HDAC活性检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备含有HDAC的样品(40μL)

添加HDAC抑制剂或测试化合物(10μL)

在室温或37℃孵育10-20分钟

添加HDAC Green 底物工作溶液(50μL)

在室温或37℃下孵育30-60分钟

监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

注意:在开始实验之前解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备工作解决方案:

1.1制备含有HDAC的测试样品:在测定缓冲液(组分B)中以1:40稀释5-10mg / mL HeLa核提取物或细胞裂解物。

注意:40μL稀释样品足以用于96孔板的一个孔。 使用前立即稀释提取物。 将溶液储存在冰上。

1.2制备HDAC抑制剂(Trichostain A)溶液的稀释液:在测定缓冲液(组分B)中以1:100稀释3mM曲古菌素A溶液(组分C),得到30μM曲古抑菌素A溶液。向每个抑制剂对照孔中加入10μL30μM曲古抑菌素A溶液。

1.3制备HDAC Green 底物工作溶液:将20μLHDACGreen 底物(组分A)和100μL信号增强剂(组分D)加入5 mL测定缓冲液(组分B)中。

注意1:稀释的HDAC Green 底物工作溶液不稳定,5 mL稀释的HDAC Green 底物工作溶液足以进行100次分析。

注意2:为每个实验准备新鲜的HDAC Green 底物工作溶液。 将重构的工作溶液保存在冰上直至使用。

 

2.运行HDAC分析:

2.1将40μL稀释的核提取物,酶溶液或其他HDAC样品和10μL测试化合物加入相应的微孔板孔中(参见说明书中的表1)。

对于阳性对照:用10μL测定缓冲液(组分B)加入40μL稀释的HDAC酶溶液或HeLa核提取物(来自步骤1.1)。

对于阴性对照:添加40μL稀释的HeLa核提取物(来自步骤1.1)和10μL30μM曲古抑菌素A溶液(来自步骤1.2),或使用不含HDAC活性的已知样品。

对于空白(无酶):仅添加50μL测定缓冲液(组分B)。

2.2将板在室温或37℃下孵育10-20分钟。

注意:为了筛选HDAC抑制剂,在添加HDAC Green 底物工作溶液之前,先用HeLa核提取物或纯酶预孵育这些化合物(参见步骤2.3)

2.3将50μLHDACGreen 底物工作溶液(来自步骤1.3)加入每个孔中。 将板在室温或37℃孵育30-60分钟。

2.4 Ex / Em = 490 / 525nm时的监测荧光强度。

 

参考文献

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说明书
Amplite 荧光法组蛋白去乙酰化酶HDAC活性检测试剂盒 绿色荧光.pdf