Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒

货号13800存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格200 Tests价格3924
Ex (nm)571Em (nm)585
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测AST的试剂盒,天冬氨酸氨基转移酶(AST),也称为血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶(GOT),是转移酶家族的成员。它催化天冬氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移,是氨基酸代谢中的重要酶。AST存在于许多身体组织中,例如肝脏,心脏,肌肉,肾脏,脑。在健康受试者中,血清AST水平低。然而,当细胞受损时,例如急性和慢性肝炎,阻塞性黄疸,肝癌,心肌梗塞,AST可能会渗入血流并且AST水平显着升高。因此,血清AST水平的测定具有重要的临床和诊断意义。

Amplite 荧光天冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒为各种生物样品中AST的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 天冬氨酸转氨酶催化天冬氨酸和α-酮戊二酸与草酰乙酸和谷氨酸的反应:

 

天冬氨酸(Asp)+α-酮戊二酸=草酰乙酸+谷氨酸(Glu)

 

通过酶偶联反应循环产生红色荧光产物来测量产物L-谷氨酸。可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm(最佳Ex / Em = 540nm / 590nm)下读取信号。使用Amplite 荧光天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒,我们在100μL反应体积中检测到低至2 mU / mL的AST。该测定是稳定的,并且可以容易地适用于各种各样的应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备AST反应混合物(50μL)

加入AST标准品或测试样品(50μL)

孵育于37℃,20-30分钟或室温,60分钟

在Ex / Em = 540 / 590nm处监测荧光增加

注意:在开始实验之前,在室温下解冻组分A和B各一瓶。

 

操作方法

1.准备AST标准品的连续稀释液(1至300 mU / mL):

1.1向DPBS缓冲液中加入所需量的AST阳性对照,制成100 U / mL AST标准溶液。

注意:未使用的AST阳性对照(组分D)应始终存储在4℃。 不要冻结。

1.2将3μL100U / mL AST标准溶液(来自步骤1.1)加入含0.1%BSA的997 L DPBS缓冲液中,得到300 mU / mL AST标准溶液。

1.3取300μL300mU / mL AST标准溶液进行1:3连续稀释,得到AST标准品的100,30,10,3,1,0.3和0 mU / mL系列稀释液。

1.4如说明书中的表1和2中所述,将AST标准品和含有AST的测试样品的系列稀释液加入到实心黑色96孔微量培养板中。

注意:如果需要,将测试样品稀释至含有0.1%BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。

 

2.准备AST测定混合物:

2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶(组分C)中,得到100X NAD溶液。

2.2将10 mL AST测定缓冲液(组分B)加入AST Enzyme Mixture瓶中(组分A),并充分混合。

2.3将整瓶100X NAD溶液(来自步骤2.1)加入到AST Enzyme Mixture溶液中(来自Step2.2)使用AST测定混合物。

注意1:该AST测定混合物足以用于两个96孔板。 在室温下不稳定,应在2小时内及时使用,避免暴露在光线下。

注意2:或者,可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50倍的AST酶混合物原液,然后通过将原液与测定缓冲液(组分B)和100x NAD混合制备AST测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X AST Enzyme Mixture储备液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃,避免冻融循环。

 

3.运行AST测定:

3.1将50μL的AST测定混合物(来自步骤2.3)加入AST标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤1.4),使得总AST测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLAST测定混合物。

3.2将反应在37°C下孵育20-30分钟或在室温下孵育60分钟,避光。

注意:空白控制的背景随着时间和温度的增加而增加。 如果在37℃下孵育30分钟,背景将很高。

3.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加(最佳Ex / Em = 540 / 590nm,在570nm处截止)。

 

参考文献

Reparative effects of astaxanthin-hyaluronan nanoaggregates against retrorsine-CCl4-induced liver fibrosis and necrosis
Authors: Yi Jhen Wu, Yu Chiuan Wu, I-Fen Chen, Yi-Lung Wu, Chin Wen Chuang, Han Hsiang Huang, Shyh Ming Kuo
Journal: Molecules (2018): 726

In vitro and in vivo study of the application of volvox spheres to co-culture vehicles in liver tissue engineering
Authors: Siou Han Chang, Han Hsiang Huang, Pei Leun Kang, Yu Chian Wu, Ming-Huang Chang, Shyh Ming Kuo
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

 

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产品名称 货号
Amplite 比色法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒 Cat#13801


说明书
Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒.pdf