Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒

货号13802存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格200 Tests价格3924
Ex (nm)571Em (nm)585
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙氨酸的试剂盒,丙氨酸氨基转移酶(ALT),也称为血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT),是转移酶家族的成员。它催化丙氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移,是氨基酸代谢中的重要酶。 ALT主要存在于肝脏中,少量存在于心脏,肌肉和肾脏中。在健康受试者中,血清ALT水平低。然而,当细胞受损时,例如急性和慢性肝炎,阻塞性黄疸,肝癌,心肌梗塞,ALT可能会渗入血流并且ALT水平显着升高。因此,测定血清ALT水平具有重要的临床和诊断意义。 Amplite 荧光丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒为各种生物样品中的ALT测量提供了一种快速而灵敏的方法。 ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸与丙酮酸和谷氨酸的反应。通过酶偶联反应循环产生红色荧光产物来测量产物谷氨酸。可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm(最佳Ex / Em = 540nm / 590nm)下读取信号。使用Amplite 荧光丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒,在100μL反应体积中检测到低至4 mU / mL的ALT。该测定是稳健的,并且可以容易地适用于各种各样的应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备ALT工作溶液(50 µL)
2.加入ALT标准液或测试样品(50 µL)
3.在37°C下孵育30分钟至60分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 ALT标准溶液:
将100 µL DPBS加到ALT阳性对照(成分D)的小瓶中,制成100 U / mL ALT储备液。

 

2.标准溶液

ALT标准
将10 µL 100 U / mL ALT标准溶液加到含0.1%BSA的990 µL DPBS缓冲液中,以生成1000 mU / mL ALT标准溶液(ALT7)。 取1000 mU / mL ALT标准溶液并进行1:3连续稀释,以得到ALT标准品(ALT6-ALT1)的连续稀释液。

 

3.工作溶液

3.1 NAD解决方案(100X):
将100 µL ddH2O加入NAD小瓶(组分C)。

3.2 ALT酶混合物溶液:
将10 mL ALT分析缓冲液(组分B)添加到ALT酶混合物(组分A)瓶中,并充分混合。

3.3 ALT工作溶液:
将整个小瓶100X NAD溶液(从1)添加到ALT酶混合物溶液(从2)中,以得到ALT工作溶液。

注意:此ALT工作溶液足以容纳两个96孔板。 它在室温下不稳定,应在2小时内及时使用,并避免暴露在光线下。或者,可以通过将200μLH2O加入组分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物储备溶液,然后通过将储备溶液与测定缓冲液(组分B)和100x NAD溶液按比例混合来制备ALT工作溶液。

 

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中的ALT标准品和测试样品的布局。 ALT = ALT标准(ALT1-ALT7,1至1000 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
ALT1 ALT1 ... ...
ALT2 ALT2 ... ...
ALT3 ALT3    
ALT4 ALT4    
ALT5 ALT5    
ALT6 ALT6    
ALT7 ALT7    

表2.黑色96孔微孔板中ALT标准品和测试样品的布局

容积 试剂
ALT1-ALT7 50ul 连续稀释(1至1000 mU / mL)
BL 50ul DPBS with 0.1% BSA
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,将ALT标准品(ALT),空白对照(BL)和测试样品(TS)制成黑色96孔微孔板。对于384孔板,请使用25 µL 每孔试剂,而不是50 µL。 注意:如果需要,在含0.1%BSA的DPBS缓冲液中将测试样品稀释至合适的浓度范围(按ALT标准指示)。

2.在ALT标准液,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL ALT工作溶液,以使ALT总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔微孔板,向每孔中加入25 µL ALT工作溶液,总体积为50 µL /孔。

3.避光保存,在37°C下孵育反应30分钟至60分钟。 注意:空白控件的背景将随着时间而增加。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm,发射= 590-600 nm(最佳Ex / Em = 540/590 nm,在570 nm截止)下监测荧光的增加。

 

参考文献

Coexistence of non-alcoholic fatty liver disease with elevated alanine aminotransferase is associated with insulin resistance in young Han males
Authors: Wang R, Lu Q, Feng J, Yin F, Qin C, Liu B, Liu Y, Liu X.
Journal: Endocrine (2012): 70

Levels of Alanine Aminotransferase Confound Use of Transient Elastography to Diagnose Fibrosis in Patients with Chronic HCV Infection
Authors: Tapper EB, Cohen EB, Patel K, Bacon B, Gordon S, Lawitz E, Nelson D, Nasser IA, Challies T, Afdhal N.
Journal: Clin Gastroenterol Hepatol. (2012)

Pegylated interferon alpha-2b plus ribavirin for Japanese chronic hepatitis C patients with normal alanine aminotransferase
Authors: Kainuma M, Furusyo N, Azuma K, Kajiwara E, Takahashi K, Nomura H, Tanabe Y, Satoh T, Maruyama T, Nakamuta M, Kotoh K, Shimoda S, Hayashi J.
Journal: Hepatol Res (2012): 33

Association of serum alanine aminotransferase and gamma-glutamyltransferase levels within the reference range with metabolic syndrome and nonalcoholic fatty liver disease
Authors: Oh HJ, Kim TH, Sohn YW, Kim YS, Oh YR, Cho EY, Shim SY, Shin SR, Han AL, Yoon SJ, Kim HC.
Journal: Korean J Hepatol (2011): 27

Changes in serum levels of HBV DNA and alanine aminotransferase determine risk for hepatocellular carcinoma
Authors: Chen CF, Lee WC, Yang HI, Chang HC, Jen CL, Iloeje UH, Su J, Hsiao CK, Wang LY, You SL, Lu SN, Chen CJ.
Journal: Gastroenterology (2011): 1240

Ferritin/alanine aminotransferase ratio as a possible marker for predicting the prognosis of acute liver injury
Authors: Ozawa E, Abiru S, Nagaoka S, Yano K, Komori A, Migita K, Yatsuhashi H, Taura N, Ichikawa T, Ishibashi H, Nakao K.
Journal: J Gastroenterol Hepatol (2011): 1326

Gender differences in healthy ranges for serum alanine aminotransferase levels in adolescence
Authors: Poustchi H, George J, Esmaili S, Esna-Ashari F, Ardalan G, Sepanlou SG, Alavian SM.
Journal: PLoS One (2011): e21178

Non-alcoholic fatty liver disease's prevalence and impact on alanine aminotransferase associated with metabolic syndrome in the Chinese
Authors: Hou XH, Zhu YX, Lu HJ, Chen HF, Li Q, Jiang S, Xiang KS, Jia WP.
Journal: J Gastroenterol Hepatol (2011): 722

Nonalcoholic fatty liver disease is associated with blood pressure in hypertensive and nonhypertensive individuals from the general population with normal levels of alanine aminotransferase
Authors: Lopez-Suarez A, Guerrero JM, Elvira-Gonzalez J, Beltran-Robles M, Canas-Hormigo F, Bascunana-Quirell A.
Journal: Eur J Gastroenterol Hepatol (2011): 1011

Relationship of hepatic steatosis and alanine aminotransferase with coronary calcification
Authors: Targher G.
Journal: Clin Chem Lab Med (2011): 741

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 蓝色 Cat#13803


说明书
Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒.pdf