Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 蓝色荧光

货号13803存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格200 Tests价格3924
Ex (nm)575Em (nm)
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测转氨酶的试剂盒,丙氨酸氨基转移酶(ALT),也称为血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT),是转移酶家族的成员。 它催化丙氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移,是氨基酸代谢中的重要酶。 ALT主要存在于肝脏中,少量存在于心脏,肌肉和肾脏中。 在健康受试者中,血清ALT水平低。 然而,当细胞受损时,例如急性和慢性肝炎,阻塞性黄疸,肝癌,心肌梗塞,ALT可能会渗入血流并且ALT水平显着升高。 因此,测定血清ALT水平具有重要的临床和诊断意义。

Amplite 比色法丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒为各种生物样品中的ALT测量提供了一种快速而灵敏的方法。 ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸与丙酮酸和谷氨酸的反应:

 

丙氨酸(Ala)+α-酮戊二酸=丙酮酸+谷氨酸(Glu)

 

通过酶偶联反应循环产生蓝色产物来测量产物谷氨酸。 可以通过吸光度酶标仪在~575nm处读取信号,或者通过A570nm至A610nm的吸光度比率来读取信号以提高测定灵敏度。 使用Amplite 比色法丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒,在100μL反应体积中检测到少至10 mU / mL的ALT。 该测定是稳健的,并且可以容易地适用于各种各样的应用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒。

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 570/610nm
推荐孔板: 透明底板


产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备ALT反应混合物(50μL)

加入ALT标准品或测试样品(50μL)

孵育于37°C 30分钟至60分钟

监测吸光度在575±5 nm处增加或在A570nm / A610nm处的吸光度比率

注意:在开始实验之前,在室温下解冻一个组分A和B

 

操作方法

1.准备ALT标准品的连续稀释液(1至1000 mU / mL):

1.1将100μLDPBS加入ALT阳性对照(组分D)小瓶中,制成100U / mL ALT储备液。

注意:未使用的ALT原液应分成单次使用的等分试样并储存在20℃。

1.2将10μL的100 U / mL ALT标准溶液(来自步骤1.1)加入含有0.1%BSA的990L DPBS缓冲液中,以产生1U / mL ALT标准溶液。

1.3取300μL1U/ mL ALT标准溶液进行1:3连续稀释,得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL ALT标准品系列稀释液。

1.4如说明书中的表1和2中所述,将ALT标准品和含有ALT的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意:如果需要,将测试样品稀释至含有0.1%BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。

 

2.准备ALT测定混合物:

2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶(组分C)中,得到100X NAD溶液。

2.2将10 mL ALT分析缓冲液(组分B)加入ALT酶混合物瓶中(组分A),并充分混合。

2.3将整瓶100X NAD溶液(来自步骤2.1)加入ALT酶混合物溶液(来自步骤2.2)以得到ALT测定混合物。

注意1:该ALT测定混合物足以用于两个96孔板。在室温下不稳定,应在2小时内及时使用,避免暴露在光线下。

注意2:或者,可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50X的ALT酶混合物原液,然后通过将原液与测定缓冲液(组分B)和100x NAD混合制备ALT测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X ALT酶混合物原液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃,避免冻融循环。

 

3.运行ALT测定:

3.1将50μLALT测定混合物(来自步骤2.3)添加至ALT标准品,空白对照和测试样品(参见步骤1.4)的每个孔中,以使总ALT测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLALT测定混合物。

3.2在37°C下孵育反应30分钟至60分钟,避光。

注意:空白控制的背景随着时间的推移而增加。

3.3使用吸光度读数器在575±5 nm或吸光度比率A570nm / A610nm监测吸光度增加,以提高检测灵敏度。

 

参考文献

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产品名称 货号
Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 Cat#13802


说明书
Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 蓝色荧光.pdf