Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒
Ex (nm) | 535 | Em (nm) | 557 |
分子量 | - | 溶剂 | - |
存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
1.可轻松加载至活细胞内
2.适配Cy3®或TRITC滤光片系统进行荧光监测
3.经优化适用于荧光显微成像和酶标仪检测
适用范围
用于细胞内NADH/NADPH检测
产品介绍
细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)及其磷酸酯(NADPH)的检测对疾病诊断和药物研发至关重要。NAD/NADH和NADP/NADPH这两对氧化还原辅酶在能量代谢、糖酵解、三羧酸循环和线粒体呼吸等过程中起关键作用。细胞中NAD(P)H水平升高与活性氧(ROS)异常产生及DNA损伤密切相关。然而,由于缺乏高灵敏度的NAD(P)H探针,生物系统内NAD(P)H的检测一直面临挑战。
Cell Meter™细胞内NADH/NADPH荧光成像试剂盒为活细胞NAD(P)H水平监测提供了高效方法。其核心成分JZL1707 NAD(P)H探针是一种性能优异的荧光探针,能特异性结合NADH/NADPH并产生高灵敏度荧光信号。该探针可轻松加载至活细胞,并可通过Cy3®或TRITC滤光片系统便捷监测荧光信号。本试剂盒经过优化,适用于荧光显微成像和酶标仪检测。
适用仪器
荧光显微镜 | |
Ex: | TRITC 滤波片组 |
Em: | TRITC 滤波片组 |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
实验示例
概述
1.在生长培养基中制备细胞
2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD(P)H工作溶液在37℃共孵育30-60分钟
3.洗涤细胞并置于检测缓冲液中
4.酶标仪检测:采用底读模式,激发/发射波长=540/590 nm(截止波长570 nm)
荧光显微镜观察:使用TRITC滤光片组
工作液配制
取10 µL JZL1707 NAD(P)H原液(组分A)加入2.5 mL检测缓冲液(组分B),混匀配制成工作液
注意:工作液在室温下可稳定保存1小时(需避光)
每个96孔板约需40 µL原液
细胞样本制备指南详见:https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
实验方案
1.刺激NADP / NADPH:96孔板:加入10 µL 10X测试化合物; 384孔板:加入5 µL 5X测试化合物(无血清培养基或PBS/HHBS等缓冲液); 对照孔(未处理的细胞):加入等量培养基或缓冲液
注意:JZL1707 NAD(P)H对血清敏感,因此建议将细胞保存在无血清培养基或您选择的缓冲液中。或者,可以在常全培养基中制备和处理细胞。 与JZL1707 NAD(P)H一起孵育时,更换为无血清培养基或缓冲液。
2.在细胞板中加JZL1707 NAD(P)H工作溶液:96孔板:每孔加入100 µL工作液 ;384孔板:每孔加入25 µL工作液,37°C避光孵育30-60分钟
注意:对于NADH / NADPH阳性对照:HeLa细胞用100 µM NADH/NADPH在无血清培养基中孵育30分钟后,再加入JZL1707 NAD(P)H工作液在37℃孵育30分钟
3.用所需缓冲液洗涤细胞一次。 移除每个孔中的溶液,并96孔板添加100μL/孔的测定缓冲液(组分B) 或 384孔板添加25μL
4.酶标仪:底部读数模式,Ex/Em=540/590 nm(Cutoff=570 nm)或者 荧光显微镜:使用Cy3®或TRITC滤光片组观察
试剂应用文献
Multi-photon, label-free photoacoustic and optical imaging of NADH in brain cells
Authors: Osaki, Tatsuya and Lee, W David and Zhang, Xiang and Zubajlo, Rebecca E and Balcells-Camps, Mercedes and Edelman, Elazer R and Anthony, Brian W and Sur, Mriganka and So, Peter TC
Journal: Light: Science \& Applications (2025): 264