Cell Meter 抗氧化活性检测试剂盒

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适用范围

用于抗氧化活性检测

 

产品介绍

活性氧（ROS）在细胞信号传导和维持细胞生理代谢过程中至关重要。然而，活性氧水平过高会损伤细胞成分，这与多种疾病相关，包括癌症、代谢紊乱、神经退行性疾病等。生物体中会生成多种抗氧化物质（包括酶、大分子和小分子），以对抗活性氧诱导的损伤。对体液、组织和细胞中抗氧化活性的定量分析，能提供重要的生物学信息。

Cell Meter 抗氧化活性检测试剂盒以 ABTS 作为抗氧化活性的比色指示剂，其检测原理是：抗氧化物质能够抑制辣根过氧化物酶（HRP）和过氧化氢（H₂O₂）将 ABTS（2,2'- 联氮 - 双（3 - 乙基苯并噻唑啉 - 6 - 磺酸））氧化为 ABTS⁺。ABTS⁺是一种可溶性显色物质，可通过分光光度计在 405nm 波长处进行检测。

样品实验方案

简要概述

1.准备样品/ Trolox（10 µL）
2.加入HRP（20 µL）
3.加入ReadiUse ABTS底物溶液（150 µL）
4.在室温下孵育5分钟
5.监控405 nm处的吸光度

 

储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融。

辣根过氧化物酶（HRP）储备溶液（2000X）

向辣根过氧化物酶（组分A）的小瓶中加入1 mL分析缓冲液（组分B）。

Trolox标准溶液（100mM）

向 Trolox（组分 D）的小瓶中加入 100 uL DMSO。

 

标准溶液配制

Trolox标准

为方便操作，可使用连续稀释计算器：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/15900

制备 Trolox 标准品时，用检测缓冲液（组分 B）稀释 100 mM 的 Trolox 标准溶液，稀释倍数为 2，最高浓度为 1 mM。

 

工作溶液配制

将向 5 mL检测缓冲液（组分 B）中加入 2.5 uL 2000 X浓度的 HRP 储备液，制成 1 X HRP 工作液。

 

样品操作及实验分析

表1.在透明的96孔微孔板中的Trolox标准品和测试样品的布局。 SD = trolox标准品（SD1-SD7，0.0156至1 mM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释（0.0156至1 mM）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	样品

1.根据表1和表1中的布局，准备trolox标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）（如有必要，在测定缓冲液中稀释样品，使抗氧化剂水平与Trolox处于同一范围内），表2。

2.向Trolox标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入20 µL HRP工作溶液，使每孔总体积为30 µL /孔。

3.向每个孔中加入150 µL ReadiUse ABTS底物溶液（组分C），使每孔总体积为180 µL /孔。

注意：避免光照，并使用聚丙烯容器。

4.在室温下孵育5分钟。

注意：5 分钟的孵育时间仅为参考，可根据需要调整孵育时间以获得更合适的吸光度。

5.使用酶标仪读取405 nm处的吸光度。