Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

DAX-J2™ PON Green 能与细胞内的ONOO⁻特异性反应，生成明亮的绿色荧光

兼容荧光成像、流式细胞术以及荧光酶标仪的检测实验。

适用范围

用于监测活细胞ONOO⁻

产品介绍

过氧亚硝酸根（ONOO⁻）是一种强氧化性物质，也是一种高活性硝化剂。它由细胞内产生的超氧阴离子自由基与一氧化氮反应生成，可对蛋白质、酶、脂质和核酸等多种生物分子造成损伤，最终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸根在体内也具有保护作用，它能参与宿主对入侵病原体的防御反应。因此，过氧亚硝酸根是一种重要的生物氧化剂，参与多种生理和病理过程。

由于过氧亚硝酸根的半衰期极短且稳态浓度较低，检测并阐明其在生物系统中的作用一直是个难题。AAT Bioquest 公司研发的 DAX-J2™ PON Green 正是为满足这一未被解决的需求而设计的，它为监测活细胞内ONOO⁻水平提供了灵敏的工具。

AAT Bioquest 的 DAX-J2™ PON Green 能与细胞内的ONOO⁻特异性反应，生成明亮的绿色荧光，可用于荧光成像、流式细胞术以及荧光酶标仪的检测实验。

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞

2.将细胞与测试化合物和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育

3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

储备溶液制备 

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用的 aliquots，制备后储存在 - 20°C。避免反复冻融

DAX-J2™ PON Green 储备液（500X）：

向DAX-J2 PON Green（组分A）中加入20 µL DMSO（组分C）。

注意：20 µL的复溶的DAX-J2 PON Green储备液足够 1 块板使用。

工作溶液制备

向 500 µL 测定缓冲液（组分 B）中加入 10 μL 500X 二甲基亚砜复溶的 DAX-J2™过氧亚硝酸根储备液，充分混合。

注意：工作液不稳定，使用前现配。

细胞样品制备，请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

样品操作及实验分析

1.向细胞板中每孔 90 µL（96 孔板）或 22.5 µL（384 孔板）的细胞培养物中加入 10 µL / 孔（96 孔板）或 2.5 µL / 孔（384 孔板）的 DAX-J2™ PON Green 工作液。

注意：染色前无需洗涤细胞。建议在完全培养基中对细胞进行染色。

2.将细胞与 DAX-J2™ PON Green 及测试化合物在完全培养基或所需缓冲液中于 37°C 共同孵育所需时间，避光。对照组（未处理细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

注意：建议在完全培养基中对细胞进行染色。但是，如果测试化合物对血清敏感，可先吸除培养基，改用1X HHBS（Hank's盐溶液+20 mM Hepes）或其他缓冲液（96孔板：90 µL/孔；384孔板：22.5 µL/孔）

3.或者，将细胞与 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 下染色 1 小时，避光。移除工作液，然后将细胞与测试化合物在完全培养基或所需缓冲液中于 37°C 处理所需时间。

4.酶标仪：底部读数模式，Ex/Em = 490/530 nm（截止波长515 nm），荧光显微镜：FITC滤光片成像

试剂应用文献