Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 适用于流式细胞仪

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产品优势

DAX-J2™ PON Green 能与细胞内的ONOO⁻特异性反应，生成明亮的绿色荧光

适用范围

用于监测活细胞ONOO⁻

产品介绍

过氧亚硝酸根（ONOO⁻）是一种强氧化性物质，也是一种高活性硝化剂。它由细胞内产生的超氧阴离子自由基与一氧化氮反应生成，可对蛋白质、酶、脂质和核酸等多种生物分子造成损伤，最终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸根在体内也具有保护作用，它能参与宿主对入侵病原体的防御反应。因此，过氧亚硝酸根是一种重要的生物氧化剂，参与多种生理和病理过程。

由于半衰期极短且稳态浓度低，过氧亚硝酸盐的检测及其生物学功能研究长期面临挑战。为此，AAT Bioquest推出了Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒提供了灵敏的活细胞ONOO⁻监测方案。DAX-J2™ PON Green，特异性与细胞内ONOO⁻反应，生成强绿色荧光产物，专为流式细胞术优化设计。

样品实验方案 

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞

2.将细胞与测试化合物（用于刺激ONOO⁻产生）和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育

3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

细胞制备指南

详细细胞样本制备方法请访问：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装成单次使用的小份，并于-20°C保存。避免反复冻融。

DAX-J2™ PON Green储备液（400X）

向DAX-J2™ PON Green（组分A）瓶中加入25 µL DMSO（组分C），混匀。

注：1 µL重悬的DAX-J2™ PON Green储备液足够用于0.4 mL细胞

实验操作方案

共孵育法

1.在完全培养基或实验缓冲液中，将细胞与DAX-J2™ PON Green及测试化合物于37°C避光共孵育所需时间

2.对照组（未处理细胞）加入等量化合物缓冲液

*注：推荐在完全培养基中染色。若测试化合物对血清敏感，可吸除含血清培养基后，用1X HHBS（Hank's盐溶液+20 mM Hepes）或其他缓冲液重悬细胞

替代方案：也可在无血清培养基中对细胞进行染色。将 Jurkat 细胞与 200 µM SIN-1 及 DAX-J2™ PON Green 在完全培养基中于 37°C 共同孵育 1 小时，以诱导过氧亚硝酸根的产生。

分步染色法

1.先用DAX-J2™ PON Green 37°C避光染色1小时

2.移除工作液后，再将细胞与测试化合物在完全培养基或所需缓冲液中于 37°C 处理所需时间

3.使用流式细胞仪FITC通道（Ex/Em=490/530 nm）监测荧光强度，圈选目标细胞群，排除细胞碎片

试剂应用文献