Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪近红外检测

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规格200 Tests价格4488
Ex (nm)650Em (nm)680
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒,一氧化氮(NO)是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫,心血管,神经变性和炎性疾病。 作为自由基,NO被快速氧化,并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用,作为DAF-2的优异替代品,用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比,Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange,可与NO反应生成亮橙色荧光产品,其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中,使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 650nm
发射: 680nm
cutoff: 665nm
推荐孔板: 黑色透明


产品说明书

样本实验方案

概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物和Nitrite NOT工作溶液孵育细胞
3.添加分析缓冲液II
4.监测Ex / Em = 650/680 nm的荧光强度

 

溶液配制

1.工作溶液

将20 µL Nitrixyte NIR储备溶液(组分A)添加到10 mL的测定缓冲液I(组分B)中,并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意:20 µL Nitrixyte NIR储备溶液足以装满一块板,远离光线。

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样品操作及实验分析

1.要刺激内源性NO,请在细胞培养基或所需的缓冲液(例如PBS或HHBS)中,用10 µL 10X测试化合物(96孔板)或5 µL 5X测试化合物(384孔板)处理细胞。对于对照孔(未处理的细胞),添加相应量的培养基或化合物缓冲液。注意:添加化合物之前不必洗涤细胞。但是,如果测试的化合物对血清敏感,则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔(96孔板)和20 µL /孔(384孔板)的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或抽吸后选择的缓冲液。或者,细胞可以在无血清培养基中生长。

2.在细胞板中加入100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Nitrixyte NIR工作溶液。将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下共同孵育一段时间,并避光。注意:请勿去除测试化合物。注意:对于NONOate阳性对照治疗:将细胞与Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下孵育30分钟。除去工作溶液,并将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。有关详细信息,请参见图1。我们在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte NIR,20 µg / mL脂多糖(LPS)和1 mM L-精氨酸(L-Arg)孵育16小时。有关详细信息,请参见图2。

3.除去每个孔中的溶液。加入测定缓冲液II(组分C),对于96孔板是100 µL /孔,对于384孔板是25 µL /孔。注意:在添加测定缓冲液II之前,请勿洗涤细胞。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 650/680 nm(截止= 665 nm)下以底部读取模式监控荧光的增加,或使用带有Cy5®滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

 

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44--48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1--12

 

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说明书
Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪近红外检测 .pdf