Helixyte Green 双链DNA定量试剂

货号17597存储条件f/l
规格1 ml价格3720
Ex (nm)501Em (nm)520
分子量661.17溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        Helixyte Green dsDNA染料是美国AAT Bioquest生产的一种超灵敏荧光核酸染料,用于定量溶液中的双链DNA(dsDNA)。最近,Helixyte Green dsDNA染料用于PCR产物的直接循环测序方法中的PCR扩增产量。使用标准光谱荧光计和2.5 ng / mL带有荧光酶标仪的dsDNA检测到少至25 pg / mL的dsDNA(在2 mL测定体积中50 pg dsDNA),在ssDNA,RNA和ss存在下检测效果最小 游离核苷酸。该测定在三个数量级上是线性的并且几乎没有序列依赖性。它是从多种来源准确测量DNA的理想选择,包括基因组DNA,病毒DNA,小量制备DNA或PCR。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Helixyte Green 双链DNA定量试剂。 



产品说明书

分析方案

以下方案是使用Helixyte Green 定量dsDNA的实例。 在打开样品瓶之前,让Helixyte Green 温热至室温。

注意:没有数据可用于解决Helixyte Green dsDNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合,所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理,并进行适当的处理。 应特别小心处理DMSO储备溶液,因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

 

1.准备Helixyte Green 工作解决方案:

1.1通过在TE(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 7.5-8.0)中浓缩DMSO溶液200倍稀释,制备Helixyte Green的水性工作溶液。 例如,将50μLHelixyteGreen添加至10 mL TE,以制备足够的工作溶液,以在200μL终体积中测定100个样品。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注1:我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备,因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注2:为获得最佳结果,该溶液应在制备后几小时内使用。

 

2.准备dsDNA标准品的连续稀释液(0至3 ng / mL):

2.1在ddH2O中制备1mg / mL的dsDNA原液(如来自Sigma的小牛胸腺DNA)。

2.2将10μL1mg / mL dsDNA原液(步骤2.1)加入到998 L TE缓冲液中,得到10μg/ mL dsDNA溶液,然后进行1:10和1:2连续稀释,得到1000,100,50,25 ,12.5,6.25,3.125和0 ng / mL。

2.3如说明书中的表1和2中所述,将dsDNA标准品和含有测试样品的DNA添加到96孔固体黑色微孔板中。

 

3.运行dsDNA测定:

3.1将100μLdsDNA测定混合物(来自步骤1.1)添加至dsDNA标准品的每个孔,空白对照和测试样品(参见步骤2.3)以使总dsDNA测定体积为200μL/孔。

注1:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLdsDNA测定混合物。

注2:对于基于曲线的测定,每曲线添加1mL样品和1mL dsDNA测定混合物。

3.2在室温下孵育反应5至10分钟,避光。

3.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)观察荧光增加。

3.4空白孔中的荧光(仅含TE缓冲液)用作对照,并从具有dsDNA反应的那些孔的值中减去。 从DNA标准曲线中产生的标准曲线确定样品的DNA浓度。

 

参考文献

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说明书
Helixyte Green 双链DNA定量试剂.pdf