Annexin V-iFluor 488标记
Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
分子量 | ~36000 | 溶剂 | Water |
存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
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产品优势
高灵敏度与特异性:通过结合外翻的PS,高效检测早期凋亡细胞。
非放射性检测:提供安全、简便的凋亡检测方法,无需放射性物质。
快速简便的操作流程:染色与分析步骤简单,实验操作时间短。
广泛的应用范围:适用于多种细胞类型及实验条件。
适用范围
用于细胞凋亡检测
产品介绍
膜膜联蛋白(Annexins)是一类依赖钙离子与磷脂膜结合的蛋白质家族。作为细胞凋亡研究的核心工具,膜联蛋白V(Annexin V)能特异性探知细胞表面暴露的磷脂酰丝氨酸(PS)——这一特征不仅是凋亡标志,也存在于其他细胞死亡形式中。
细胞活性的评估指标多样,其中膜联蛋白V-荧光偶联物(Annexin V-dye conjugates)通过检测PS外翻现象,成为凋亡监测的黄金标准。在凋亡进程中,磷脂酰丝氨酸会从细胞膜内侧翻转向外侧,这种表面PS的暴露作为凋亡早中期的普适性指标,其检出时间点甚至早于细胞形态学改变。
Annexin V-iFluor 488标记的光谱特性与Alexa Fluor® 488相似(注:Alexa Fluor® 488为Invitrogen公司注册商标)。
操作步骤摘要
1.制备含测试化合物的细胞样本(200 µL/样本)
2.加入膜联蛋白V偶联物检测溶液
3.室温避光孵育30-60分钟
4.使用流式细胞仪或荧光显微镜进行分析
储存与处理条件
荧光标记膜联蛋白V偶联物储存于含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS缓冲液(pH 7.4)中。为保持稳定性,建议-20℃避光保存,避免反复冻融(可能影响蛋白完整性)。在推荐条件下可稳定保存至少6个月。
标准实验方案
膜联蛋白V偶联物细胞孵育步骤
1.配制膜联蛋白V结合缓冲液:10 mM HEPES,140 mM NaCl,2.5 mM CaCl₂,pH 7.4
2.用测试化合物处理细胞诱导凋亡(如:Jurkat细胞用星形孢菌素处理4-6小时)
3.离心收集细胞(1-5×10⁵细胞/管)
4.用200 μL膜联蛋白V结合缓冲液重悬细胞
5.加入2 μL膜联蛋白V偶联物
(可选)加入死细胞染料如碘化丙啶(货号17585)标记坏死细胞
6.室温避光孵育30-60分钟
7.在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μLAnnexin V缀合测定缓冲液(来自步骤1)以增加体积
8.使用流式细胞仪或荧光显微镜检测荧光强度
流式细胞仪检测
使用匹配滤光片的流式细胞仪定量膜联蛋白V结合情况
注:贴壁细胞因收获过程可能损伤膜结构,常规不建议用于流式检测。但Casiola-Rosen等已建立相关实验方法。
荧光显微镜检测
1.从步骤6中吸取细胞悬液,使用膜联蛋白V结合缓冲液(步骤1)洗涤1-2次,随后用相同缓冲液重悬细胞。
2.将细胞悬液滴加至已覆盖盖玻片的载玻片上。
注:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片上进行培养。
3.完成膜联蛋白V偶联物孵育(步骤6)后,用膜联蛋白V结合缓冲液(步骤1)洗涤1-2次,并重新加入该缓冲液至盖玻片。
4.倒置载玻片观察细胞。也可在膜联蛋白V偶联物孵育后,使用2%甲醛固定细胞,并通过配备相应滤光片组的显微镜进行观察。
试剂应用文献
Authors: Ma, Yunhao and Zhu, Hongmei and Jiang, Xinrong and Zhou, Zhongkun and Zhou, Yong and Tian, Yanan and Tu, Lixue and Lu, Juan and Niu, Yuqing and Du, Liqian and others,
Journal: ACS Omega (2024)
Authors: Xu, Peirong and Zhao, Yulan and Feng, Yue and Zhao, Mindie and Zhao, Ruqian
Journal: Cell Biology and Toxicology (2024): 1--15