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Cell Meter 活细胞Caspase 2结合检测试剂盒 绿色荧光

英文名称:Cell Meter™ Live Cell Caspase 2 Binding Assay Kit *Green Fluorescence*
产品参数
Ex (nm)493Em (nm)517
分子量-溶剂Water
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品货期

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产品优势

兼容荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪

 

适用范围

用于细胞凋亡检测

 

产品介绍

Cell Meter™活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒采用荧光FMK半胱天冬酶抑制剂的检测原理。该抑制剂具有细胞膜通透性和非细胞毒性特性,进入细胞后可共价结合活性半胱天冬酶。

Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒专为通过检测活细胞中caspase 2的活化水平来监测细胞凋亡而设计,适用于定量分析凋亡细胞的caspase 2活性,或用于筛选caspase 2抑制剂。试剂盒中的绿色荧光标记物FAM- VDVAD-FMK可直接通过荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪检测凋亡细胞中激活的caspase 2。本试剂盒提供所有必需组分及经过优化的检测方案。

 

适用仪器

流式细胞仪  
激发: 见表1
发射: 见表1
荧光显微镜  
激发: 见表1
发射: 见表1
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 见表1
发射: 见表1
通道: 黑色透明
读取模式: 底读模式

表1:用于流式细胞仪和荧光显微镜的荧光强度检测。

  FAM-VDVAD-FMK 碘化丙啶 hoechst 染料
流式细胞仪 FL1 通道 FL2通道 FL1通道
荧光显微镜 FITC 通道 TRITC 通道 DAPI通道
荧光酶标仪 490/525nm 535/635nm 350/461nm

 

实验方案

分离细胞的检测方案

概述

1.用测试化合物制备细胞,密度为5×105至2×106个细胞/ mL

2.按 1:150 的比例向细胞溶液中加入 FAM-VDVAD-FMK

3.室温孵育1小时

4.离心收集细胞,洗涤后用缓冲液或生长培养基重悬

5.荧光强度检测(底部读数模式):Ex/Em=490/525 nm(截止波长515 nm)

荧光显微镜:使用FITC滤光片

流式细胞仪:选用FL1通道

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

储备溶液配制

除非另有说明,所有未使用的储备液应分装成单次使用量,制备后储存在 - 20°C。避免反复冻融。

FAM-VDVAD-FMK储备液(150X):

向 FAM-VDVAD-FMK(组分 A)的小瓶中加入 50 µL 二甲基亚砜(DMSO),配制 150X FAM-VDVAD-FMK储备液

 

有关细胞样品制备

请访问:https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

实验方案

1.根据特定的诱导方案培养细胞至适合凋亡诱导的密度,但不超过 2×10⁶个细胞 /mL。同时,对于每种标记条件,培养与诱导组密度相同的未诱导阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。

2.按 1:150 的比例向细胞溶液中加入 150X FAM-VDVAD-FMK 储备液,将细胞置于 37°C、5% CO₂培养箱中孵育 1 小时。

注 a.用于 FAM-VDVAD-FMK标记的细胞可浓缩至约 5×10⁶个细胞 /mL。

    b.对于贴壁细胞,用 0.5 mM EDTA 轻轻吹打细胞以保持细胞完整,在与 FAM-VDVAD-FMK孵育前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

    c.合适的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度,需为每个实验优化孵育时间。

3.以约 200g 的离心力离心细胞 5 分钟,用 1 mL 洗涤缓冲液(组分 B)洗涤细胞两次,然后将细胞重悬于适量的洗涤缓冲液中。

注1:FAM-VDVAD-FMK具有荧光,因此必须洗去所有未结合的试剂以消除背景干扰。对于悬浮细胞,应将细胞浓度调整为每块微量滴定板的每个孔中 2-5×10⁵个细胞 / 100 µL。

4.如果需要,可用DNA染色标记细胞(例如用 碘化丙啶标记死细胞,或用 Hoechst 标记全细胞群的细胞核)

5.通过荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪监测荧光强度,参数如下:

FAM-VDVAD-FMK:Ex/Em=490/525 nm

碘化丙啶:Ex/Em=535/635 nm

Hoechst 染料:Ex/Em=350/461 nm

 

流式细胞仪

使用FL1的通道监测荧光强度(碘化丙啶染色使用FL2通道)。圈选目标细胞群,排除细胞碎片。

 

荧光显微镜

将 100 µL 细胞悬液加入 96 孔黑色微量滴定板的每个孔中。在荧光显微镜下观察细胞,其中FAM-VDVAD-FMK使用 FITC 通道(碘化丙啶染色使用TRITC通道,Hoechst染色使用DAPI通道)。

 

荧光酶标仪

将 100 µL 细胞悬液加入 96 孔黑色微量滴定板的每个孔中。使用荧光酶标仪(底部读数模式)在 Ex/Em = 490/525 nm(截止波长 = 515 nm)处监测荧光强度。

注意:若需要平衡细胞浓度,可调整诱导组细胞的悬液体积,使其细胞密度接近未诱导组。如果细胞处理不会导致刺激组细胞数量大幅减少,此调整步骤可省略。