钙离子荧光探针Fluo4AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3*

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产品优势  

1.低背景荧光：Fluo-4与Ca²⁺结合后会显著增强荧光信号，因此能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.适用范围广：活细胞Ca²⁺成像、流式细胞术、药物筛选、GPCR功能研究等。

3.单波长检测：荧光强度随Ca²⁺浓度升高而增强，

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

Fluo-4 AM是一种细胞膜渗透性绿色荧光钙离子探针，广泛应用于荧光显微镜和流式细胞术检测。

Fluo-4添加AM基团实现细胞渗透性。这增加了其疏水性，使其能够轻松穿透活细胞的完整膜结构。进入细胞后，普遍存在的非特异性细胞内酯酶会切割AM酯基团。因为AM酯基团会淬灭荧光。因此，只有在具有活性酶的活细胞中才能检测到钙信号。

Fluo-4 AM可用于通过多种仪器平台研究细胞内游离钙离子浓度，包括荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪。鉴于GPCR作为治疗靶点的重要性，Fluo-4在高通量筛选和药物研发应用中也具有重要意义。

溶液配制

除特别说明外，所有未使用的储备液均应分装为单次用量，配制后保存于-20°C环境，并避免反复冻融

Fluo-4 AM储备溶液

使用高质量无水DMSO制备2至5 mM 的Fluo-4 AM储备溶液。

工作溶液配制

Fluo-4 AM工作溶液

1.实验当天，将Fluo-4AM溶解在DMSO中，或将储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.选用合适的缓冲液（如Hanks-Hepes缓冲液）配制2-20 μM工作液，并添加0.04% Pluronic® F-127表面活性剂。针对多数细胞系，推荐4-5 μM终浓度，具体加载浓度需通过实验优化。

注：Pluronic F-127用于提高Fluo-4 AM的水溶性。可从百萤购买各种Pluronic F-127溶液。
注：若细胞存在有机阴离子转运体，建议在工作液中添加1-2 mM丙磺舒（孔内终浓度0.5-1 mM）以防止水解产物外排。多种形式的丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日，将1X Fluo-4 AM工作溶液添加到孔板中。

注意：如果你的化合物干扰血清，在染色前用新鲜的HHBS缓冲液代替生长培养基。

3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。

注：将染料培养2小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。

4.用含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）或者HHBS缓冲液代替染料工作溶液，去除多余的探针。

5.使用FITC滤光片荧光显微镜（激发/发射490/525 nm，Cutoff515 nm）或配备液体分配系统的酶标仪（如FDSS/FLIPR/FlexStation）进行实时荧光检测

试剂应用文献