钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM

货号20591存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格10x50 ug价格4488
Ex (nm)492Em (nm)650
分子量~1100溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

关键参数

仪器:荧光酶标仪

Ex:490

Em:525/660

Cutoff:515/630

推荐孔板:黑色孔板

 

仪器:荧光显微镜

通道:FITC

推荐孔板:黑壁透明底

 

仪器:流式酶标仪

Ex比率: FITC/PerCP

Em比率:FITC/PerCP

 

产品介绍

细胞内钙通量测定是一种广泛使用的监测GPCR和钙通道活性的方法。为了量化细胞内钙浓度,比率荧光钙指示剂是优选的,因为该比例与钙浓度直接相关并且与细胞数量和染料负载浓度无关。然而,最流行的比率钙指示剂(例如Fura-2和Indo-1)具有某些限制,例如较低的灵敏度,UV激发,并且与HTS筛选过滤器组不兼容。Cal Red R525 / 650已被开发为新的488 nm可激发的比率荧光钙指示剂。Cal Red R525 / 650是弱荧光的,一旦进入细胞,亲脂性AM阻断基团被细胞内酯酶切割,导致带负电的荧光染料在细胞中保持良好,激发接近488nm,两次发射在525nm和650nm。当用生物活性化合物刺激细胞时,该受体启动细胞内钙的释放,其被Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时,发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容,对细胞的损伤最小,使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。由Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时,发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容,对细胞的损伤最小,使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。由Cal Red R525 / 650螯合。当在488nm激发时,发射信号在525nm处增加并在650nm处减小。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容,对细胞的损伤最小,使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的有力工具。

产品活细胞中的实验方案(点击查看)

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针



产品说明书

操作说明

1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。


2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal Red R525 / 650 AM储备液。
2.1Cal Red R525 / 650 AM使用量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg Cal Red R525 / 650AM与-454.13μL无水DMSO混合。

 

3.使用10μMCalRed R525 / 650 AM 4,0.08%Pluronic®F-127和2 mM Probenecid在HHBS中制备2X工作溶液。
3.1Cal Red R525 / 650 AM的最终孔内浓度:5μM
3.2Pluronic®F-127的最终孔浓度:0.04%
3.3最终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal Red R525 / 650AM,25.6μL的10%Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议Cal Red R525 / 650 AM的最终浓度为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127孔浓度最终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至以下:5μMCalRed R525 / 650 AM,0.04%Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

 

5.孵育染料加载板

5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
 

8.运行实验。
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/650 nm运行实验。

 

参考文献

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说明书
钙离子荧光探针Cal Red R525/650 AM.pdf