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钙离子荧光探针Fura8FF , AM

英文名称:Fura-8FF™, AM
产品参数
Ex (nm)354Em (nm)524
分子量973.86溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

具有细胞渗透性的 Fura-8FF AM 是 Fura-8 AM 的类似物,具有低得多的钙结合亲和力,Kd ~10 µM。 Fura-8FF 的发射转移到与常见滤光片组兼容的更长可见波长。 Fura-8FF™ AM 对钙比 Fura-2FF AM 更敏感,信号/背景比比 Fura-2FF AM 更高。即,通过检测530 nm 处的发射强度来计算 354 nm 和 415 nm 处的激发强度比。

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适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Fura 滤波片组
Em: Fura 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 355,415 nm
Em: 530 nm
Cutoff: 475nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理

 

溶解方案(溶剂以说明书为准)

  0.1 mg 0.5 mg 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 102.684 µL 513.421 µL 1.027 mL 5.134 mL 10.268 mL
5 mM 20.537 µL 102.684 µL 205.368 µL 1.027 mL 2.054 mL
10 mM 10.268 µL 51.342 µL 102.684 µL 513.421 µL 1.027 mL
实验方案

实验方案

储备溶液配制

在高质量无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Fura-8FF 储备溶液。

 

工作溶液配制

Fura-8FF工作溶液
1.实验当天,将 Fura-8FF 溶解在 DMSO 中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液(例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液)中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Fura-8FF 工作溶液。对于大多数细胞系,建议终浓度为 4-5 μM 的 Fura-8FF。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注:非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Fura-8FF 的水溶性。可以从百萤购买各种 Pluronic® F-127 解决方案。
注:如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中(孔中的最终浓度为 0.5-1 mM),以减少脱酯后探针的泄漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品,包括水溶性、钠盐和稳定溶液,均可从百萤购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天,将 1X Fura-8FF 工作溶液添加到细胞板中。
注意:如果您的化合物干扰血清,请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
注:孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒)代替染料工作溶液,以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂,并使用配备 Fura-8FF 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统(如 FlexStation)的荧光酶标仪同时测量荧光

 

试剂应用文献

Small-molecule--based generation of functional cardiomyocytes from human umbilical cord--derived induced pluripotent stem cells
Authors: Wu, Kai Hong and Wang, Su Yun and Xiao, Qian Ru and Yang, Yu and Huang, Ning Ping and Mo, Xu Ming and Sun, Jian
Journal: Journal of cellular biochemistry (2018)
 
Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Zhao, Tao and Guo, Dongqing and Gu, Yuchun and Ling, Yang
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259--2263
 
Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Guo, Dongqing and Gu, Junzhong and Jiang, Hui and Ahmed, Asif and Zhang, Zhiren and Gu, Yuchun
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179--187
 
Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Guo, Dong-Qing and Zhang, Hao and Tan, Sheng-Jiang and Gu, Yu-Chun
Journal: PloS one (2014): e113649
 

 

参考文献

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A flow cytometric comparison of Fura-8FF-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux
Authors: Bailey S, Macardle PJ.
Journal: J Immunol Methods (2006): 220
 
Ratiometric intracellular calcium imaging in the isolated beating rat heart using Fura-8FF-1 fluorescence
Authors: Eerbeek O, Mik EG, Zuurbier CJ, van 't Loo M, Donkersloot C, Ince C.
Journal: J Appl Physiol (2004): 2042
 
Negative inotropic effects of angiotensin II, endothelin-1 and phenylephrine in Fura-8FF-1 loaded adult mouse ventricular myocytes
Authors: Sakurai K, Norota I, Tanaka H, Kubota I, Tomoike H, Endo M.
Journal: Life Sci (2002): 1173
 
Usefulness of the analytic method of intracellular calcium and the problems--aequorin and Fura-8FF-1 signal
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Comment on "Usefulness of intracellular calcium analysis and the problem--aequorin and Fura-8FF-1 signal"
Authors: Imaizumi Y., undefined
Journal: Nippon Yakurigaku Zasshi (2000): 101
 
Concentrations of caffeine greater than 20 mM increase the Fura-8FF-1 fluorescence ratio in a Ca(2+)-independent manner
Authors: McKemy DD, Welch W, Airey JA, Sutko JL.
Journal: Cell Calcium (2000): 117
 
Intracellular calcium signals measured with Fura-8FF-1 in isolated skeletal muscle fibres from control and mdx mice
Authors: Collet C, Allard B, Tourneur Y, Jacquemond V.
Journal: J Physiol (1999): 417
 
Measurement of [Ca2+]i in cell suspensions using Fura-8FF-1
Authors: Nelemans A., undefined
Journal: Methods Mol Biol (1999): 41
 
Alpha-stat calibration of Fura-8FF-1 fluorescence and measurement of intracellular free calcium in rat ventricular cells at different temperatures
Authors: Wang SQ, Zhou ZQ.
Journal: Life Sci (1999): 871