新型钙离子荧光探针Calbryte590AM *细胞渗透性*

产品货期

现货

产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

细胞内钙流检测是监测信号转导通路及高通量筛选G蛋白偶联受体（GPCRs）和钙通道靶标的重要方法。自1989年Rhod-2问世后，后续开发的Rhod-4和Cal-590凭借更高的信噪比，成为共聚焦显微镜、流式细胞术和高通量筛选应用中广泛使用的红色荧光钙离子指示剂。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4和Cal-590的钙响应灵敏度比Rhod-2 AM提高了10倍。然而，与绿色荧光钙指示剂（如Fluo-8和Cal-520）相比，Cal-590和Rhod-4在细胞内的钙灵敏度仍显不足。

Calbryte™ 590是新一代红色荧光钙离子指示剂，其显著提升的信噪比和细胞内滞留特性，使其成为评估GPCR和钙通道靶标、筛选活细胞激动剂和拮抗剂的最可靠红色荧光探针。与其他染料AM负载方式类似，Calbryte™ 590 AM酯本身无荧光，进入细胞后经胞内酯酶水解激活。激活后的指示剂为极性分子，无法自由穿透细胞膜，从而被有效截留在细胞内。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

 Calbryte™ 590® AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的 Calbryte™ 590® AM储备液。

注意： Calbryte™ 590® AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

 Calbryte™ 590® AM 工作溶液

实验当天，将 Calbryte™ 590® AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的 Calbryte™ 590® AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强 Calbryte™ 590® AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X  Calbryte™ 590® AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备TRITC/CY3滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 540/590 nm cutoff 570 nm检测荧光信号

试剂应用文献