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新型钙离子荧光探针Calbryte590AM *细胞渗透性*

英文名称:Calbryte™ 590 AM
产品参数
Ex (nm)581Em (nm)593
分子量1218.77溶剂DMSO
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

新型钙离子荧光探针Cal-520 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,这些钙敏感染料明显更亮,并提供更高的信噪比,大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内,Cal520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光Calbryte 染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表示细胞内钙的释放,这显着增加了Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM, Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外,Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂,可与绿色荧光蛋白(GFP)细胞系进行多色检测。 此外,Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发,并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化,可在555 nm激发,并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针。

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新型钙离子荧光探针Calbryte 590, AM在活细胞中的实验方案(点击查看)

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: TRITC/Cy3 滤波片组
Em: TRITC/Cy3 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em: 590 nm
Cutoff: 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

实验方案

溶液配制

1.储备溶液配制

Calbryte 590 AM 储备溶液

在无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Calbryte 590 AM 储备溶液。

注意:当在 DMSO 中复溶时,Calbryte 590 AM 是透明、无色的溶液。

2.工作溶液配制

Calbryte 590 AM 工作溶液

2.1实验当天,将 Calbryte 590 AM 溶解在 DMSO 中,或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.2在您选择的缓冲液(例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液)(货号20011)中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Calbryte 590 AM 工作溶液。对于大多数细胞系,建议终浓度为 4-5 μM 的 Calbryte 590 AM。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注意:非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Calbryte 590 AM 的水溶性。可以从百萤购买购买。

注意:如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中(孔中的最终浓度为 0.5-1 mM),以减少脱酯后染料的外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品,包括水溶性、钠盐和稳定溶液,均可从百萤购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将Calbryte 590 AM加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的特定需求进行修改。

a)将细胞在生长培养基中培养过夜。

b)第二天,将 1X Calbryte 590 AM 工作溶液添加到细胞孔板中。

注意:如果您的化合物干扰血清,请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

c)将载有染料的孔板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意:孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。

d)用 HHBS 或您选择的缓冲液(包含阴离子转运蛋白抑制剂,例如 1 mM 丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除任何多余的探针。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟,然后将板在室温下再孵育15分钟。

f)用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂(如1 mM丙磺舒)的缓冲液替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)根据需要添加刺激剂,同时使用配备 FITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统(例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation)的荧光酶标仪在 Ex/Em = 540/590 nm 处测量荧光。

 

参考文献

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