新型钙离子荧光探针Calbryte630AM *细胞渗透性*

产品货期

现货

产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.应用范围广：用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等技术研究细胞内游离钙浓度的变化。

3.细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子检测在众多生物学研究中至关重要。能够与钙结合并产生光谱响应的荧光探针，使得研究人员可以通过荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱分析和荧光酶标仪等技术，研究细胞内游离钙离子浓度的变化。x-Rhod-1是一种常用的红色荧光钙离子指示剂，但其在活细胞中经酯酶水解后荧光信号较弱，且钙响应变化较小。为此，研究人员开发了Calbryte™ 630，它在保持与x-Rhod-1相同光谱波长（兼容Texas Red®滤光片系统）的同时，显著提升了细胞负载效率和钙响应灵敏度。在CHO和HEK细胞中，Calbryte™ 630 AM的钙响应灵敏度远高于x-Rhod-1。

Calbryte™ 630的光谱与FITC、Alexa Fluor® 488和GFP能够很好地区分开来，因此它是与GFP细胞系或FITC/Alexa Fluor® 488标记抗体进行多重细胞内检测的理想钙探针。作为新一代红色荧光钙离子指示剂，Calbryte™ 630凭借显著提升的信噪比和细胞内滞留特性，成为评估GPCR和钙通道靶标、筛选活细胞激动剂和拮抗剂的最可靠深红色荧光探针。与其他染料AM负载方式类似，Calbryte™ 630 AM酯本身不具有荧光特性，当其进入细胞后，会被细胞内的酯酶水解并激活。活化后的指示剂转变为极性分子，无法自由穿过细胞膜，从而被有效地滞留于细胞内。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

 Calbryte™ 630® AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的 Calbryte™ 630® AM储备液。

注意： Calbryte™ 630® AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

 Calbryte™ 630® AM 工作溶液

实验当天，将 Calbryte™ 630® AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的 Calbryte™ 630® AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强 Calbryte™ 630® AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X  Calbryte™ 630® AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备Texas Red滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 600/640 nm cutoff 630 nm检测荧光信号

试剂应用文献