钙离子荧光探针Fluo3AM CAS 121714-22-5

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产品优势  

1.低背景荧光：Fluo-3本身无荧光，只有在与Ca²⁺结合后才会显著增强荧光信号，因此能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.适合活细胞检测：AM修饰使其具有细胞膜通透性，可轻松进入活细胞，随后被细胞内酯酶水解为游离的Fluo-3，从而实现对胞内Ca²⁺的动态监测。

3.适用范围广：活细胞Ca²⁺成像、流式细胞术、药物筛选、GPCR功能研究等。

4.单波长检测：荧光强度随Ca²⁺浓度升高而增强，

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子浓度检测在众多生物学研究中至关重要。能够特异性结合Ca²⁺并产生光谱响应的荧光探针，使科研人员得以运用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等技术手段，精确监测细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化。在可见光激发的钙离子荧光探针中，Fluo-3与Rhod-2最为常用。其中，Fluo-3系列探针已广泛应用于流式细胞分析和共聚焦激光扫描显微技术。

Fluo-3 AM酯近年来在基于细胞的高通量筛选中被大量用于G蛋白偶联受体（GPCR）功能检测。该探针具有独特的荧光特性：未结合Ca²⁺时基本无荧光，而在Ca²⁺饱和状态下量子产率可达约0.14，其Ca²⁺解离常数（Kd）为390 nM。

实验方案

储备溶液配制

（除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用量，配制后于-20°C保存，避免反复冻融）

Fluo-3 AM储备液

使用高质量无水DMSO配制2~5 mM的Fluo-3 AM储备液。

工作溶液配制

Fluo-3 AM工作溶液

1.实验当天，将Fluo-3AM溶解于DMSO或 解冻储备液至室温

2.选用合适的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2~20 μM的Fluo-3 AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4~5 μM，具体浓度需根据细胞类型优化确定

注：1.Pluronic® F-127（非离子洗涤剂）可增强Fluo-3 AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

       2.若细胞表达有机阴离子转运体，建议在工作液中加入1~2 mM丙磺舒（probenecid，孔内终浓度0.5~1 mM），以减少水解后探针的外漏。AAT Bioquest提供多种即用型ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性制剂、钠盐及稳定化溶液等可选规格。可从百萤生物直接购买。

实验操作流程

以下为活细胞AM酯染色推荐步骤，本方案仅提供指南，请根据实际需求调整

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日向细胞板中加入1× Fluo-3 AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，在染色前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。

注意：某些细胞系延长孵育时间（>2小时）可增强信号强度。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液，以去除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备FITC滤光片的荧光显微镜 或 集成程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）在490/525nm，Cutoff=515nm处检测荧光强度

试剂应用文献