钙离子荧光探针Fura2AM CAS 108964-32-5

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现货

产品优势  

Fura-2 AM 是一种紫外光激发的比率法钙离子指示剂，其在钙离子结合后会发生激发波长位移，从而实现对细胞内钙离子浓度的定量测量，且不受染料负载量及细胞厚度的影响。

比率法钙测量：激发波长随钙结合状态变化，从 380 nm（游离态）位移至 340 nm（钙结合态）。

定量钙浓度测定：解离常数 Kd = 145 nM，测量结果不受染料浓度或细胞厚度影响。

紫外激发：发射波长为 510 nm，可与可见光染料搭配进行多色实验。

便于校准：通过测定 Rmax/Rmin 可实现钙离子绝对定量。

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

Fura-2 AM 是一种细胞可渗透的比率法钙离子荧光指示剂，在紫外光激发下发出绿色荧光。

Fura-2 AM 是 Fura-2 的膜渗透性形式。它属于比率法钙离子指示剂类别，该类指示剂还包括 Indo-1 等荧光染料。这些探针通过观察螯合钙时荧光团在两个波长的变化，并计算这两个测量点的比值来实现钙的定量。这与强度计量型探针（如 Fluo-4）仅利用单一光谱值形成对比。

原理与机制

当结合钙离子后，Fura-2 在 300 至 400 nm波长范围内的吸光度会发生位移：未结合钙的染料其最大激发波长为 380 nm，而结合钙的染料其最大激发波长为 340 nm。通过扫描激发光谱并监测 510 nm处的发射光，可以测量这种吸光度的变化。计算得到的 340/380 nm比值与细胞内钙离子浓度成正比。

Fura-2 与 Fluo-4 的比较

与单波长钙探针（如 Fluo-4）相比，比率法染料如 Fura-2 具有若干优势，主要包括能够减轻染料负载量、染料泄漏和光漂白对实验结果的影响。

Fura-2 与 Indo-1 的比较

Fura-2 是一种激发比率型染料，其吸收光谱会发生位移（340/380 nm）。而 Indo-1 是一种发射比率型染料，其发射光谱会发生位移（400/480 nm）。

操作步骤

储备液配制

所有未使用的储备液（除非另有说明）应在配制后分装成单次使用量，并于-20°C保存。避免反复冻融。

Fura-2 AM储备液

使用优质无水DMSO配制2至5 mM的Fura-2 AM储备液。

工作液配制

Fura-2 AM工作液

实验当天，将Fura-2 AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温。

选用合适缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2至20 µM的Fura-2 AM工作液。对多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料负载浓度需通过实验优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Fura-2 AM水溶性，AAT Bioquest提供多种Pluronic® F-127溶液。
          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少去酯化染料的渗漏。AAT Bioquest提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

标准实验流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整：

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日向细胞板加入1X Fura-2 AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3. 37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟。

注意：部分细胞系延长孵育时间（>1小时）可增强信号强度。

4.移除工作液，更换为HHBS或自选缓冲液（如适用，可含1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）。

5.加入刺激剂后，立即使用配备Fura 2滤光片组的荧光显微镜或者集成程序化液体处理系统（如FlexStation）的荧光酶标仪在Ex/Em₁ = 340/510 nm截止475 nm和Ex/Em₂ = 380/510 nm截止475 nm检测荧光

试剂应用文献