钙离子荧光探针Fura-2,AM
货号21023存储条件F/L
规格20x50 ug价格2340
Ex (nm)363Em (nm)512
分子量1001.86溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        钙离子荧光探针Fura-2,AM是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂,钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的药物发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4 系列钙检测试剂是最亮的绿色和红色钙指示剂,而我们的Cal-520®和Cal-590 具有最高的细胞内钙检测信号/背景比,因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以最高质量提供其他钙指标,如Fluo-4,Fluo-3,Fura-2,Indo-1,Rhod-5N和Rhod-2 AM,百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

 

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

 

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用等式:[Ca]free = Kd[F - Fmin]/Fmax - F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Fura-2,AM Cat#21020


说明书
钙离子荧光探针Fura-2,AM.pdf