钙离子荧光探针Fura Red,AM *CAS 149732-62-7*

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产品优势  

1.相较于单波长钙探针，能有效减少染料负载量差异、细胞渗漏及光漂白等因素的干扰。

2.可通过显微光度法、成像或流式细胞术对单细胞中的钙离子进行比率测量

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

Fura Red是一种可见光激发的fura-2类似物，当与单激发绿色荧光钙指示剂（如Fluo-3 AM、Fluo-8 AM或Cal-520 AM）联用时，可通过显微光度法、成像或流式细胞术对单细胞中的钙离子进行比率测量。其细胞通透性形式Fura Red AM可实现非侵入式细胞内负载，并能与上述绿色荧光探针同时装载于细胞中。这种双探针联用体系的优势在于可采用更长波长的激发光，相比Fura-2等需要紫外或近紫外光激发的比例型染料，可见光激发的光毒性显著降低，对细胞更为友好。

操作步骤

储备液配制

所有未使用的储备液（除非另有说明）应在配制后分装成单次使用量，并于-20°C保存。避免反复冻融。

Fura Red AM储备液

使用优质无水DMSO配制2至5 mM的Fura-10 AM储备液。

工作液配制

Fura Red AM工作液

实验当天，将Fura Red AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温。

选用合适缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2至20 µM的Fura Red AM工作液。对多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料负载浓度需通过实验优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Fura Red AM水溶性，AAT Bioquest提供多种Pluronic® F-127溶液。
          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少去酯化染料的渗漏。AAT Bioquest提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

标准实验流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整：

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日向细胞板加入1X Fura Red AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3. 37°C细胞培养箱中孵育30-60分钟。

注意：部分细胞系延长孵育时间（>1小时）可增强信号强度。

4.移除工作液，更换为HHBS或自选缓冲液（如适用，可含1 mM丙磺舒等阴离子转运体抑制剂）。

5.加入刺激剂后，立即使用集成程序化液体处理系统（如FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em₁ = 435/630 nm截止610 nm和Ex/Em₂ = 470/650 nm截止630 nm检测荧光

试剂应用文献

Ultrasound-mediated spatial and temporal control of engineered cells in vivo
Authors: Ivanovski, Filip and Me{\v{s}}ko, Maja and Lebar, Tina and Rupnik, Marko and Lain{\v{s}}{\v{c}}ek, Du{\v{s}}ko and Gradi{\v{s}}ek, Miha and Jerala, Roman and Ben{\v{c}}ina, Mojca
Journal: Nature Communications (2024): 7369