钙离子荧光探针Rhod-5N, AM
货号21070存储条件F/L
规格1 mg价格2940
Ex (nm)551Em (nm)577
分子量1154.92溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        钙离子荧光探针Rhod-5N, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针,钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应,使研究人员能够通过荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-5N对Ca2+的结合亲和力(Kd =~320μM)低于任何其他基于BAPTA的指示剂,并且适用于10μM至1mM的Ca2+测量。与Rhod-2指示剂一样,Rhod-5N在不存在二价阳离子的情况下基本上是非荧光的,并且表现出强烈的荧光增强,在结合Ca2+时没有光谱移位。Rhod-5N AM是Rhod-5N的细胞渗透型。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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产品说明书

操作说明

1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Rhod-5N,AM原液。
2.1使用量的Rhod-5N,AM:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg Rhod-5N,AM与432.93μL无水DMSO混合。
 

3.用含有10μMRhod-5N,AM 4的HHBS制备2X工作溶液,0.08%Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终孔内浓度为Rhod-5N,AM:5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度:0.04%
3.3最终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Rhod-5N,AM,25.6μL的10%Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议最终浓度为Rhod-5N,AM为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至以下:5μM的Rhod-5N,AM,0.04%Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 551/577 nm运行实验。

 

参考文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Takahito Miyake, Hisashi Shirakawa, Takayuki Nakagawa, Shuji Kaneko
Journal: Glia (2015): 1870--1882

ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Nadezda Apostolova, Leysa J Gomez-Sucerquia, Fernando Alegre, Haryes A Funes, Victor M Victor, Maria D Barrachina, Ana Blas-Garcia, Juan V Esplugues
Journal: Journal of hepatology (2013): 780--789



说明书
钙离子荧光探针Rhod-5N, AM.pdf