钙离子荧光探针Fluo-8FF,钾盐

货号21103存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格1 mg价格3840
Ex (nm)495Em (nm)516
分子量913.05溶剂Water
产品详细介绍


简要概述

钙离子荧光探针Fluo-8FF,钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂,钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中,Fluo-3和Fluo-4最常用。但是,Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光,并且需要苛刻的细胞加载条件才能最大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应,同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长(在〜490 nm处具有最大激发和在〜520 nm处具有最大发射)。Fluo-8®AM仅需要室温,而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外,Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍,是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂,具有不同的钙结合亲和力(Fluo-8®:Kd = 389 nM; Fluo-8H:Kd = 232 nM; Fluo-8L:Kd = 1.86 µM; Fluo-8FF :Kd = 10 µM)。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针Fluo-8FF,钾盐。

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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针



产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南,实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意:非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验(见说明书中的表1)。

 

2.测量细胞内钙响应:

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:[Ca]free = Kd[F - Fmin]/Fmax - F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

试剂应用文献

AMPA receptors in the synapse turnover by monomer diffusion
Authors: 
Morise, Jyoji and Suzuki, Kenichi GN and Kitagawa, Ayaka and Wakazono, Yoshihiko and Takamiya, Kogo and Tsunoyama, Taka A and Nemoto, Yuri L and Takematsu, Hiromu and Kusumi, Akihiro and Oka, Shogo
Journal: 
Nature communications (2019): 1--18

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Authors: Feng, Shengjie and Dang, Shangyu and Han, Tina Wei and Ye, Wenlei and Jin, Peng and Cheng, Tong and Li, Junrui and Jan, Yuh Nung and Jan, Lily Yeh and Cheng, Yifan
Journal: Cell Reports (2019): 567--579

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Journal: Cells (2019): 1139

MRGPRX4 is a bile acid receptor for human cholestatic itch
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