钙离子荧光探针Fluo8FF, AM
Ex (nm) | 495 | Em (nm) | 516 |
分子量 | 1082.91 | 溶剂 | DMSO |
存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
1.卓越的光学性能:荧光强度达Fluo-4 AM的2倍,Fluo-3 AM的4倍
2..适用范围广:通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等,精确监测活细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化
3.快速加载细胞:Fluo-8可在室温下轻松完成细胞加载,而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM必须37°C加载
适用范围
用于钙离子检测
产品介绍
钙离子检测在众多生物学研究中具有关键作用。能与Ca²⁺结合产生特征性光谱响应的荧光探针,使科研人员能够通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等技术手段,精确监测活细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化。在可见光激发的钙离子指示剂中,Fluo-3 AM和Fluo-4 AM是活细胞钙成像最常用的探针,但其经酯酶水解后在活细胞中的荧光强度中等,且需要较苛刻的细胞加载条件才能获得最佳钙响应信号。
Fluo-8®系列染料在保持与Fluo-3/Fluo-4相近光谱特性(激发/发射波长约490/520 nm)的同时,显著改善了细胞加载效率和钙响应性能。相较于Fluo-3 AM和Fluo-4 AM必须37°C加载的条件,Fluo-8® AM可在室温下完成细胞加载,其荧光强度达到Fluo-4 AM的2倍、Fluo-3 AM的4倍。
AAT Bioquest提供具有不同钙结合亲和力的优质Fluo-8®试剂:Fluo-8®(Kd=389 nM)、Fluo-8H™(Kd=232 nM)、Fluo-8L™(Kd=1.86 µM)、Fluo-8FF™(Kd=10 µM), 也提供多种包装规格(如1mg、10×50μg、20×50μg及高通量筛选套装)以满足特殊需求。
适用仪器
荧光显微镜 | |
Ex: | FITC 滤波片组 |
Em: | FITC 滤波片组 |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
荧光酶标仪 | |
Ex: | 490 nm |
Em: | 525 nm |
Cutoff: | 515 nm |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
读取模式: | 底读模式/可分液处理 |
实验方案
储备溶液配制
所有未使用的储备液需分装为单次用量,于-20°C避光保存,避免反复冻融
Fluo-8FF® AM 储备液
用高质量无水 DMSO 制备 2 - 5 mM Fluo-8FF® AM 储备溶液。
工作溶液配制
Fluo-8FF® AM 工作溶液
在实验当天,将Fluo-8FF AM溶解在DMSO中,或将储备溶液的等分试样解冻至室温。,用含0.04% Pluronic® F-127的缓冲液(如Hanks-Hepes)稀释至2-20 μM。大多数细胞系,建议使用终浓度为 4-5 μM 的 Fluo-8L® AM。必须需根据细胞类型调整浓度
注意: 1.Pluronic® F-127 可增强 Fluo-8FF® AM 的水溶性。可以从百萤进行购买。
2.若细胞存在有机阴离子转运体,建议在工作液中添加1-2 mM丙磺舒(孔内终浓度0.5-1 mM)以防止水解产物外排。多种形式的丙磺舒产品,包括水溶性、钠盐和稳定溶液,可从百萤购买。
操作步骤
以下是推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。
1.在生长培养基中制备细胞过夜。
2.第二天,将 1X Fluo-8FF® AM 工作溶液添加到孔板中。
注意:如果您的化合物会干扰血清,请在加载染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。
注意 将染料孵育 2 小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用 HHBS 或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,例如 1 mM 丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除多余的探针。
5.根据需要添加刺激物,同时使用配备有 FITC 滤光片组的荧光显微镜或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的荧光板读取器在 490/525 nm 截止波长 515 nm 处检测荧光。