钙离子荧光探针Fluo8FF, AM

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产品优势  

1.卓越的光学性能：荧光强度达Fluo-4 AM的2倍，Fluo-3 AM的4倍

2..适用范围广：通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等，精确监测活细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化

3.快速加载细胞：Fluo-8可在室温下轻松完成细胞加载，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM必须37°C加载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子检测在众多生物学研究中具有关键作用。能与Ca²⁺结合产生特征性光谱响应的荧光探针，使科研人员能够通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光酶标仪等技术手段，精确监测活细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化。在可见光激发的钙离子指示剂中，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM是活细胞钙成像最常用的探针，但其经酯酶水解后在活细胞中的荧光强度中等，且需要较苛刻的细胞加载条件才能获得最佳钙响应信号。

Fluo-8®系列染料在保持与Fluo-3/Fluo-4相近光谱特性（激发/发射波长约490/520 nm）的同时，显著改善了细胞加载效率和钙响应性能。相较于Fluo-3 AM和Fluo-4 AM必须37°C加载的条件，Fluo-8® AM可在室温下完成细胞加载，其荧光强度达到Fluo-4 AM的2倍、Fluo-3 AM的4倍。

AAT Bioquest提供具有不同钙结合亲和力的优质Fluo-8®试剂：Fluo-8®（Kd=389 nM）、Fluo-8H™（Kd=232 nM）、Fluo-8L™（Kd=1.86 µM）、Fluo-8FF™（Kd=10 µM）， 也提供多种包装规格（如1mg、10×50μg、20×50μg及高通量筛选套装）以满足特殊需求。

实验方案

储备溶液配制

所有未使用的储备液需分装为单次用量，于-20°C避光保存，避免反复冻融

Fluo-8FF® AM 储备液

用高质量无水 DMSO 制备 2 - 5 mM Fluo-8FF® AM 储备溶液。

工作溶液配制

Fluo-8FF® AM 工作溶液

在实验当天，将Fluo-8FF AM溶解在DMSO中，或将储备溶液的等分试样解冻至室温。，用含0.04% Pluronic® F-127的缓冲液（如Hanks-Hepes）稀释至2-20 μM。大多数细胞系，建议使用终浓度为 4-5 μM 的 Fluo-8L® AM。必须需根据细胞类型调整浓度

注意： 1.Pluronic® F-127 可增强 Fluo-8FF® AM 的水溶性。可以从百萤进行购买。

            2.若细胞存在有机阴离子转运体，建议在工作液中添加1-2 mM丙磺舒（孔内终浓度0.5-1 mM）以防止水解产物外排。多种形式的丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，可从百萤购买。

操作步骤

以下是推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中制备细胞过夜。

2.第二天，将 1X Fluo-8FF® AM 工作溶液添加到孔板中。

注意：如果您的化合物会干扰血清，请在加载染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。

注意 将染料孵育 2 小时以上可以提高某些细胞系的信号强度。

4.用 HHBS 或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，例如 1 mM 丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

5.根据需要添加刺激物，同时使用配备有 FITC 滤光片组的荧光显微镜或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的荧光板读取器在 490/525 nm 截止波长 515 nm 处检测荧光。