钙离子荧光探针Rhod4AM

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产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.适用范围广：通过荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱分析和荧光酶标仪等，监测细胞内游离Ca²⁺浓度的动态变化

3.线粒体靶向性：通过膜电位依赖富集于线粒体中，避免与其他细胞器（如内质网）交叉标记

适用范围

用于线粒体钙离子检测

产品介绍

钙离子测量对众多生物学研究至关重要。借助与Ca2+结合后产生光谱响应的荧光探针，研究人员得以通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计和荧光微孔板检测仪等手段研究细胞内游离钙离子浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2是目前最常用的探针。但Rhod-2 AM在活细胞中经酯酶水解后仅呈现中等强度荧光，且对细胞内钙离子变化的响应极其微弱。

为此我们开发了Rhod-4™——在保持Rhod-2光谱特性的基础上，显著改善了细胞加载效率与钙响应灵敏度。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4™ AM的钙响应灵敏度可达Rhod-2 AM的10倍。AAT Bioquest提供灵活多样的Quest Rhod-4™包装规格以满足特殊需求，包括：1mg装；10×50µg分装；20×50µg分装；以及高通量筛选（HTS）专用套装。

实验方案

溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液均应分装成单次使用量，配制后保存于-20°C环境。避免反复冻融

储备溶液

Rhod-4 AM 储备溶液

在无水 DMSO 中制备 2 - 5 mM Rhod-4 AM 储备溶液。

工作溶液配制

Rhod-4 AM 工作溶液

1.实验当天，将 Rhod-4 AM 溶解在 DMSO 中，或将等份指示剂储备溶液解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）（货号20011）加入 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 - 20 µM Rhod-4 AM 工作溶液。

对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Rhod-4 AM。具体加载浓度需通过实验确定。

注意：非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Rhod-4™ AM水溶性。可以从百萤购买。

注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可在工作液中添加1-2 mM丙磺舒（孔板内终浓度0.5-1 mM）以减少水解后探针外漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从百萤购买。

操作步骤

以下是我们推荐的将Rhod-4 AM加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的特定需求进行修改。

1.将细胞在生长培养基中培养过夜。

2.次日，将 1X Rhod-4 AM 工作溶液添加到细胞孔板中。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需更换为新鲜HHBS缓冲液

3.将载有染料的孔板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。

注意：部分细胞系延长孵育时间（>1小时）可增强信号强度

4.更换为HHBS或自选缓冲液（含阴离子转运抑制剂如1 mM丙磺舒）以清除残余探针

5.根据需要添加刺激剂，同时使用配备 TRITC 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的荧光酶标仪在 Ex/Em = 540/590 nm 处检测荧光信号。

试剂应用文献