钙离子荧光探针Cal520FF, AM

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产品优势  

1.低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

2.多色兼容性：绿色荧光，适用于多通道成像

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

Cal-520® AM 是一种新型荧光钙离子探针，为检测细胞内钙离子动员提供了高效均质的荧光检测方案。与绿色钙离子指示剂（如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM）相比，其信噪比和细胞内保留性显著提升。

该染料可穿透细胞膜，预先负载于表达特定GPCR或钙离子通道（以钙信号传导为通路）的细胞中；进入细胞后，其疏水性封闭基团会被酯酶水解，形成带负电荷的荧光染料并保留于胞内，且与钙离子结合时荧光强度大幅增强。当细胞受激动剂刺激时，受体信号通路引发钙离子释放，使 Cal-520® 荧光信号显著增强。Cal-520® AM具有长波长、高灵敏度、>100倍荧光增强等特性，是测量细胞钙信号的理想指示剂。其高信噪比和好的的胞内保留性，使其成为评估GPCR与钙离子通道靶点、筛选激动剂与拮抗剂的强效工具。

在Cal-520®系列产品中，Cal-520FF™对钙离子的亲和力最低，其解离常数Kd约为10μM。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

Cal-520FF® AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的Cal-520FF® AM储备液。

注意：Cal-520FF® AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

Cal-520FF® AM 工作溶液

实验当天，将Cal-520FF® AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的Cal-520FF® AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Cal-520FF® AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X Cal-520FF® AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备FITC滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 490/525 nm，截止波长515 nm检测荧光信号