钙离子荧光探针Cal-520N, 钾盐
货号21147存储条件F/L
规格10x50 ug价格4140
Ex (nm)492Em (nm)514
分子量1004.17溶剂Water
产品详细介绍


简要概述

        钙离子荧光探针Cal-520N, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针,Cal-520®提供了一种功能强大的基于荧光的均质检测工具,用于检测细胞内钙的动员。Cal-520®AM是一种新型的荧光钙敏感染料,与现有的绿色钙指示剂(如Fluo-3 AM和Fluo-4 AM)相比,信噪比和细胞内滞留性显着提高。表达通过钙信号的感兴趣的GPCR或钙通道的细胞可以预装可穿过细胞膜的Cal-520®AM。一旦进入细胞内,Cal-520 AM的亲脂性封闭基团就会被酯酶裂解,从而产生带负电荷的荧光染料,并留在细胞内部。与钙结合后,其荧光大大增强。当细胞被激动剂刺激时,该受体发出信号释放细胞内钙,可以显着提高Cal-520®的荧光。Cal-520®AM具有长波长,高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性,使其成为测量细胞钙的理想指示剂。高信噪比和更好的细胞内滞留性使Cal-520®钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的强大工具。Cal-520®钠盐或钾盐是细胞中Cal-520®AM的水解盐。它选择性地与钙离子结合,并具有强烈​​依赖于钙浓度的荧光。与其他Cal-520®指标相比,Cal-520N 对钙的亲和力最低,Kd〜90 uM。荧光增强100倍,使Cal-520®AM成为测量细胞钙的理想指示剂。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal-520N, 钾盐。

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产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal-520N ,AM原液。
2.1Cal-520N ,AM使用量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg Cal-520N ,AM与435.56μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMCal-520N ,AM 4在HHBS中制备2X工作溶液,0.08%Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终孔内浓度为Cal-520N ,AM:5μM
3.2Pluronic®F-127的最终孔内浓度:0.04%
3.3最终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal-520N,AM,25.6μL的10%Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议使用Cal-520N™的最终浓度,AM为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至以下:5μMCal-520N,AM,0.04%Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育60-90分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/514 nm运行实验。

 

参考文献

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
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说明书
钙离子荧光探针Cal-520N, 钾盐.pdf