pH荧光探针BCECF, AM CAS 117464-70-7
| Ex (nm) | 504 | Em (nm) | 527 |
| 分子量 | 808.69 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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适用范围
用于细胞pH监测
产品介绍
细胞内pH值在许多细胞活动中起着重要的调控作用，包括细胞生长、钙调节、酶活性、受体介导的信号转导、离子转运、内吞作用、趋化性、细胞粘附及其他细胞过程。近年来，pH敏感性荧光染料被广泛应用于监测细胞内pH的变化。使用荧光pH指示剂的成像技术还能让研究人员以更高的空间分辨率和采样密度来研究这些过程，这是微电极等其他技术难以实现的。其中，2',7'-双-(2-羧乙基)-5-(和-6)-羧基荧光素（BCECF）是最常用的pH探针，因为它可通过比率法监测细胞pH值。BCECF AM是BCECF的细胞膜渗透性版本。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | FITC 滤波片组 |
| Em： | FITC 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490, 430 nm |
| Em： | 535 nm |
| Cutoff： | 515 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底读模式 |
实验方案示例
储备液配制
除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用量，配制后保存于-20°C，并避免反复冻融。
BCECF AM储备液
用高质量无水DMSO配制2~20 mM的BCECF AM储备液。
工作液配制
BCECF AM工作液
实验当天，将BCECF AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温，用所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）配制5~50 µM的工作液。
注意：1.可使用非离子型去垢剂Pluronic® F-127增加AM酯的水溶性，工作液中Pluronic® F-127终浓度建议为0.02%（相关产品可从百萤生物购买）。
2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入丙磺舒（probenecid，1-2 mM）以减少去酯化探针的泄漏（孔内终浓度0.5-1 mM）。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶性钠盐及稳定溶液）。
实验操作流程
以下为哺乳动物活细胞加载BCECF AM的推荐方案，需根据具体需求调整。
1.按实验要求制备活细胞。
2.向细胞板中加入BCECF AM工作液（96孔板：100 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）。
注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需用新鲜HHBS缓冲液替换生长培养基（96孔板：100 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）。
3.将细胞板置于37°C培养箱中孵育30~60分钟。
4.吸弃染料工作液，用HHBS或所选缓冲液洗涤以去除多余探针。
5.用HHBS或所选缓冲液配制化合物板（96孔板：50 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）。
6.按需进行pH检测，同步通过以下任一方式测量荧光：
配备FITC滤光片的荧光显微镜；
荧光酶标仪（Ex/Em = 490/535 nm，截止515 nm）。
若需比率法检测，需监测：
Ex/Em1 = 430/535 nm（截止515 nm）
Ex/Em2 = 505/535 nm（截止515 nm）。
