pH荧光探针BCECF, AM是美国AAT Bioquest生产的用于检测pH的荧光探针，细胞内pH在许多细胞事件中起重要的调节作用，包括细胞生长，钙调节，酶活性，受体介导的信号转导，离子转运，胞吞作用，趋化性，细胞粘附和其他细胞过程。近年来，pH敏感性荧光染料已被广泛应用于监测细胞内pH的变化。使用荧光pH指示剂的成像技术还允许研究人员使用其他技术（如微电极）实现更大的空间分辨率和采样密度来研究这些过程。其中，2'，7'-双 - （2-羧乙基）-5-（和-6） - 羧基荧光素（BCECF）是最常用的pH探针，因为它可用于比率监测细胞pH。BCECF AM是BCECF的细胞渗透型。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的pH荧光探针BCECF, AM。

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操作步骤

1.准备HHBS缓冲液和10％Pluronic®F-127溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至20 mM BCECF，AM原液。
2.1使用的BCECF，AM的量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg BCECF，AM与618.28μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMBCECF，AM 3在HHBS中制备2X工作溶液和0.08％Pluronic®F-127。
3.1最终孔内浓度为BCECF，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3在合适的容器中混合16μLBCECF，AM和25.6μL10％Pluronic F-127。然后，添加HHBS或您的缓冲区
选择直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议最终浓度为BCECF，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMBCECF，AM，0.04％Pluronic®F-127
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育30-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.准备HHBS缓冲区（或您选择的缓冲区）。
6.1在合适的容器中加入HHBS或您选择的缓冲液，直至体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 503/528 nm运行实验。

参考文献

The F0F1 ATP synthase regulates human neutrophil migration through cytoplasmic proton extrusion coupled with ATP generation
Authors: Jun Gao, Tian Zhang, Zhanfang Kang, Weijen Ting, Lingqing Xu, Dazhong Yin
Journal: Molecular Immunology (2017): 219--226

Oxidative Stress-Activated NHE1 Is Involved in High Glucose-Induced Apoptosis in Renal Tubular Epithelial Cells
Authors: Yiqing Wu, Min Zhang, Rui Liu, Chunjie Zhao
Journal: Yonsei Medical Journal (2016): 1252--1259

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