pH荧光探针BCECF, AM*纯* CAS 117464-70-7
| Ex (nm) | 504 | Em (nm) | 527 |
| 分子量 | 808.69 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
咨询
适用范围
用于细胞pH监测
产品介绍
细胞内pH值作为关键调控因子，广泛参与细胞生长、钙离子稳态、酶活性调节、受体介导的信号转导、离子跨膜运输、内吞作用、趋化运动、细胞黏附等多种生理过程。近年来，pH敏感性荧光染料已成为监测细胞内pH动态变化的常用工具。相较于微电极等传统技术，基于荧光pH指示剂的成像技术能够提供更优异的空间分辨率和采样密度。其中，2',7'-双(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素（BCECF）凭借其独特的比率法检测优势，成为最常用的pH探针；而BCECF AM作为BCECF的化衍生物，具有细胞膜穿透特性。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | FITC 滤波片组 |
| Em： | FITC 滤波片组 |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490, 430 nm |
| Em： | 535 nm |
| Cutoff： | 515 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 读取模式: | 底读模式 |
实验方案示例
储备液配制
除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用量，配制后保存于-20°C，并避免反复冻融。
BCECF AM超纯级储备液
用高质量无水DMSO配制2~20 mM的BCECF AM储备液。
工作液配制
BCECF AM超纯级工作液
实验当天，将BCECF AM溶解于DMSO或解冻储备液至室温，用所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）配制5~50 µM的工作液。
注意：1.可使用非离子型去垢剂Pluronic® F-127增加AM酯的水溶性，工作液中Pluronic® F-127终浓度建议为0.02%（相关产品可从百萤生物购买）。
2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入丙磺舒（probenecid，1-2 mM）以减少去酯化探针的泄漏（孔内终浓度0.5-1 mM）。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶性钠盐及稳定溶液）。
实验操作流程
以下为哺乳动物活细胞加载BCECF AM的推荐方案，需根据具体需求调整。
1.按实验要求制备活细胞。
2.向细胞板中加入BCECF AM工作液（96孔板：100 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）。
注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载染料前需用新鲜HHBS缓冲液替换生长培养基（96孔板：100 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）。
3.将细胞板置于37°C培养箱中孵育30~60分钟。
4.吸弃染料工作液，用HHBS或所选缓冲液洗涤以去除多余探针。
5.用HHBS或所选缓冲液配制化合物板（96孔板：50 µL/孔；384孔板：25 µL/孔）。
6.按需进行pH检测，同步通过以下任一方式测量荧光：
配备FITC滤光片的荧光显微镜；
荧光酶标仪（Ex/Em = 490/535 nm，截止515 nm）。
若需比率法检测，需监测：
Ex/Em1 = 430/535 nm（截止515 nm）
Ex/Em2 = 505/535 nm（截止515 nm）。
