PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *蓝色荧光*

产品货期

现货

产品优势

操作简便、结果可靠

适用范围

用于焦磷酸盐检测

产品介绍

焦磷酸盐（PPi）存在于多种生化反应过程中，例如ATP水解、DNA与RNA聚合反应、腺苷酸环化酶催化生成环AMP以及脂肪酸活化形成辅酶A酯等。

PhosphoWorks™焦磷酸检测试剂盒提供了可靠的分光光度法检测方案。该试剂盒采用独有的荧光焦磷酸探针，其荧光强度与焦磷酸盐浓度成正比。相较于需要至少两种酶进行焦磷酸盐检测的酶偶联法，本检测方案操作更简便、结果更可靠。

PhosphoWorks™焦磷酸检测试剂盒提供检测焦磷酸盐所需的所有核心组分，并已成功应用于高通量筛选（HTS）场景。如需进行超过10,000次检测的高通量筛选，欢迎垂询专属大包装折扣方案。 

操作步骤

简要概述

制备焦磷酸盐标准品和/或测试样品（50 µL）

加入焦磷酸盐工作溶液（50μL）

在室温下孵育10至30分钟

于Ex/Em = 316/456 nm（截止波长420 nm）监测荧光强度

储备溶液制备

除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分装为单次使用量，配制后保存于-20°C，避免反复冻融

PPi探针储备溶液（200X）：

向PPi探针（组分B）瓶中加入50 µL DMSO（组分D），配制200X PPi探针储备液，避光保存。

注：25 µL PPi传感器储备液可满足一个96孔板检测需求

焦磷酸盐标准溶液（1 mM）：

取50 mM焦磷酸盐标准品（组分C）10 µL，加入490 µL  ddH2O或50 mM Hepes缓冲液（pH 7），配制1 mM焦磷酸盐标准溶液。

标准溶液梯度制备

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/21611

取100 µM焦磷酸盐标准溶液（PS7），用ddH2O或50 mM Hepes缓冲液进行1:3系列稀释，获得浓度梯度标准品（PS6-PS1）

制备工作溶液

向5 mL检测缓冲液（组分A）中加入25 µL 200X PPi探针储备液，混匀后即为PPi工作液

注：本检测对PPi高度敏感，需使用无PPi的实验器材和试剂。≥1 mM DTT会增高背景信号，≥2 mM MgCl₂会降低响应值。

样品试验方案

表1.固体黑色96孔微孔板中焦磷酸盐标准品和测试样品的布局

PS =焦磷酸盐标准品（PS1-PS7,0.3至100μM），BL =空白对照，TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备焦磷酸盐标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向焦磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLPPi工作溶液，使焦磷酸盐总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLPPi工作溶液，总体积为50μL/孔。 彻底混合试剂。

3.在室温下孵育10至30分钟。

4.用荧光酶标仪在Ex/Em = 316/456 nm（截止波长420 nm）检测荧光强度

试剂应用文献