PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *PPi选择性高*

产品货期

现货

产品优势

操作简便、结果可靠

适用范围

用于焦磷酸盐检测

产品介绍

焦磷酸盐（PPi）产生于多种生化反应过程中，例如ATP水解、DNA与RNA聚合、腺苷酸环化酶催化生成环AMP以及脂肪酸活化形成辅酶A酯等。

PhosphoWorks™焦磷酸盐检测试剂盒提供了最稳定的分光光度法来测量焦磷酸盐含量。该试剂盒采用我们独有的荧光焦磷酸盐探针，其荧光强度与焦磷酸盐浓度成正比。相较于磷酸盐和ATP，本试剂盒使用的PPi传感器对焦磷酸盐具有高的选择性。相比需要至少两种酶进行焦磷酸盐检测的酶偶联法，我们的检测方法更加简便可靠。

本试剂盒提供检测焦磷酸盐所需的所有核心组分，已成功应用于高通量筛选（HTS）。如需进行超过10,000次检测的高通量筛选，敬请垂询专属的大批量采购优惠方案。

操作步骤

简要概述

准备PPi探针工作溶液（50μL）
添加焦磷酸盐标准品和/或测试样品（50μL）
在室温下孵育10至30分钟
检测Ex / Em = 370/470 nm处的荧光强度（cutoff= 455 nm）

溶液制备

1.制备储备溶液

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 PPi探针储备溶液（200X）：
将50μLDMSO（组分D）加入到PPi探针（组分B）的小瓶中以制备200X PPi探针储备溶液。 注意：对于一个96孔板，25μLPPiSensor储备溶液就足够了。

2.制备标准溶液

焦磷酸盐标准
通过将10μL50mM焦磷酸盐标准品（组分C）加入490μL测定缓冲液（组分A）或您选择的缓冲液（优选50 mM Hepes缓冲液，pH 7）中制备1 mM焦磷酸盐标准品，制成1 mM焦磷酸盐标准品。 取1 mM焦磷酸盐标准品（PS7）进行1：3连续稀释，得到连续稀释的焦磷酸盐标准品（PS6-PS1）和测定缓冲液（组分A）。

3.制备工作溶液

将25μL200XPPi Sensor储备溶液加入5 mL分析缓冲液（组分A）中，并充分混合。 注意：由于该检测方法对PPi具有高灵敏度，因此使用不含PPi的实验室器具和试剂非常重要。 注意：DTT（1 uM）会增加背景，MgCl2≥2mM会降低反应。

样品实验方案

表1.实心黑色96孔微孔板中焦磷酸盐标准品和测试样品的布局。

PS =焦磷酸盐标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

根据表1和2中提供的布局制备焦磷酸盐标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

向焦磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLPPiSensor工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLPPiSensor工作溶液，总体积为50μL/孔。

在室温下孵育反应10-30分钟，避光。

使用荧光酶标仪在Ex / Em = 370/470 nm（截止= 455 nm）下检测荧光

试剂应用文献