PhosphoWorks 比色ATP分析试剂盒

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产品优势

在 100μL 反应中，可检测低至~3 µM 的 ATP

 

适用范围

用于ATP检测

 

产品介绍

三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量代谢、代谢调控和细胞信号传导中发挥着基础性作用。它被称为细胞内能量转移的 “分子货币”，为活细胞内的诸多过程及化学合成提供动力。ATP 还可作为细胞间通讯的信号分子，并在 DNA 和 RNA 合成中发挥重要作用

AAT Bioquest 公司提供多种生物发光检测试剂盒，借助重组萤火虫荧光素酶（产品货号 21610 和 21609）可对纳摩尔（nM）级别的 ATP 进行测定。这些试剂盒需搭配酶标仪使用，常用于细胞活力或细胞毒性检测。

PhosphoWorks™比色法 ATP 检测试剂盒利用一系列由 ATP 诱导的酶偶联反应，生成过氧化氢，再通过 Amplite® 红色底物在 570nm 波长处进行分光光度法定量。在 100μL 反应中，该试剂盒可检测低至~3 µM 的 ATP，几乎不受ADP和AMP的干扰。本试剂盒为生物样本中的ATP水平检测提供了稳定、简便、高效的解决方案，与荧光素酶的 ATP 检测试剂盒形成技术互补。 

样品实验方案

简要概述

1.准备ATP工作溶液（50 µL）

2.添加ATP标准液或测试样品（50 µL）

3.在室温下孵育10-30分钟

4.监测570 nm处的吸光度

 

溶液配制

储备溶液

除非另有说明，所有未使用的储备液在制备后应分为一次性使用的等分试样，并于 - 20°C 储存。避免反复冻融。

Amplite 红色底物储备液（200X）：

向 Amplite™红色底物（组分 A）的瓶中加入 30μL 二甲基亚砜（组分 E），配制 200X Amplite™红色底物储备液。

ATP标准溶液（10mM）：

向 ATP 标准品（组分 D）的瓶中加入 0.5mL ddH2O，配制 10mM ATP 标准溶液。

 

制备标准溶液

ATP标准

为方便操作，可使用系列稀释计算器：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/21617

取 10μL 10mM ATP 标准溶液加入 990μL 1X PBS 缓冲液中，配制 100μM ATP 标准溶液（AS7）。取 100μM ATP 标准溶液（AS7），用 1X PBS 缓冲液进行 1:2 系列稀释，得到系列稀释的 ATP 标准品（AS6-AS1）。

 

制备工作溶液

1.向酶混合液瓶（组分 B）中加入 5mL 检测缓冲液（组分 C），充分混匀。

向酶混合液瓶中加入 25μL 200X Amplite™红色底物储备液，充分混匀，制成 ATP 工作液。

 

样品示例及操作

表1.透明底部96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。 AS = ATP标准品（AS1-AS7，1.56至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成。

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（1.56至100 µM）
BL	50ul	1 X PBS缓冲液
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局，准备ATP标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.向每孔 ATP 标准品、空白对照和测试样品中加入 50μL ATP 工作液，使 ATP 检测的总体积达到每孔 100μL。对于 384 孔板，则向每孔加入 25μL ATP 工作液，总体积为每孔 50μL。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.用酶标仪在570 nm波长处监测吸光度值变化。

 

试剂应用文献

Photothermal-Responsive Conjugated Polymer Nanoparticles Triggered Precise Augmentation of Microalgal Photosynthesis
Authors: Zhang, Miaomiao and Gao, Chenying and Wang, Pengcheng and Li, Rui and Huang, Yiming and Lv, Fengting and Li, Cheng and Bai, Haotian and Zhang, Deqing and Wang, Shu
Journal: ACS nano (2025)