钙黄绿素, AM
货号22002存储条件F/L
规格1 mg价格1140
Ex (nm)495Em (nm)515
分子量994.86溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        钙黄绿素, AM是美国AAT Bioquest生产的用于细胞活力测定的试剂,Calcein AM是一种疏水性化合物,很容易渗透完整的活细胞。 它广泛用于细胞活力测定。 通过细胞内酯酶水解非荧光钙黄绿素AM产生强荧光的亲水钙黄绿素,其在细胞质中良好保留。 酯酶活性与小瓶细胞的数量成比例,因此与由钙黄绿素AM的酯酶催化水解产生的钙黄绿素的荧光强度直接相关。 Calcein AM是用于标记和监测活细胞细胞功能的最流行的荧光探针之一。 然而,Calcein AM的单色使得在多色应用中不可能使用这种有价值的试剂。 例如,由于Calcein AM具有与GFP相同的颜色,因此不可能将Calcein AM与GFP转染的细胞组合使用。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙黄绿素。

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产品说明书

使用细胞活力指标AM酯类

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针加载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。 DMSO储备溶液可以在20℃下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

 

a)在高质量无水DMSO中制备2至5mM AM酯的储备溶液。非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加AM酯的水溶性。

注意:在稀释到上样缓冲液中之前,可将等体积的20%Pluronic®F-127溶液添加到细胞活力指示剂的DMSO储备溶液中。最终的Pluronic®F-127浓度约为0.02%。

注意:不建议在Pluronic®F-127存在下长期储存AM酯。

b)在实验当天,要么将细胞活力的固体指示剂溶解在DMSO中,要么将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,建议最终浓度范围为4至5μM的细胞活力指标。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37℃下将细胞与AM酯孵育20分钟至1小时。

d)在不含细胞活力指示剂的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如果适用)中洗涤细胞以除去过量的探针。

注意:通过流式细胞术立即分析细胞样品,以确定在零时间没有洗涤的每个细胞的平均荧光。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验 。

 

参考文献

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说明书
钙黄绿素, AM.pdf