钙黄绿素, AM

        钙黄绿素, AM是美国AAT Bioquest生产的用于细胞活力测定的试剂，Calcein AM是一种疏水性化合物，很容易渗透完整的活细胞。 它广泛用于细胞活力测定。 通过细胞内酯酶水解非荧光钙黄绿素AM产生强荧光的亲水钙黄绿素，其在细胞质中良好保留。 酯酶活性与小瓶细胞的数量成比例，因此与由钙黄绿素AM的酯酶催化水解产生的钙黄绿素的荧光强度直接相关。 Calcein AM是用于标记和监测活细胞细胞功能的最流行的荧光探针之一。 然而，Calcein AM的单色使得在多色应用中不可能使用这种有价值的试剂。 例如，由于Calcein AM具有与GFP相同的颜色，因此不可能将Calcein AM与GFP转染的细胞组合使用。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙黄绿素。

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使用细胞活力指标AM酯类

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针加载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在20℃下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5mM AM酯的储备溶液。非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加AM酯的水溶性。

注意：在稀释到上样缓冲液中之前，可将等体积的20％Pluronic®F-127溶液添加到细胞活力指示剂的DMSO储备溶液中。最终的Pluronic®F-127浓度约为0.02％。

注意：不建议在Pluronic®F-127存在下长期储存AM酯。

b）在实验当天，要么将细胞活力的固体指示剂溶解在DMSO中，要么将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议最终浓度范围为4至5μM的细胞活力指标。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37℃下将细胞与AM酯孵育20分钟至1小时。

d）在不含细胞活力指示剂的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如果适用）中洗涤细胞以除去过量的探针。

注意：通过流式细胞术立即分析细胞样品，以确定在零时间没有洗涤的每个细胞的平均荧光。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验 。

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