MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒
货号22405存储条件F/L
规格100 Tests价格3540
Ex (nm)450Em (nm)630
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

        MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒,CTC流式细胞术活菌分析试剂盒提供了一种简便的方法,可根据呼吸活动评估细菌的健康和活力。 CTC本身是非荧光的,一旦被活细菌细胞表面的电子转移系统还原,就会形成红色和不溶性荧光CTC甲maz,可以用流式细胞仪检测到。 不能呼吸的死细菌或以较低频率呼吸的不健康细菌将不产生或产生很少的带有CTC染色的红色荧光,因此可对细菌种群的健康状况进行半定量测量。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒。 



产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备10倍染料储备液
2.准备细菌样本
3.将细菌样品与CTC在37°C孵育30分钟
4.PE-Texas Red通道通过流式细胞仪分析样品

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. CTC储备溶液(10倍):
将1 mL蒸馏水加到CTC(组分A)小瓶中,制成10X储备液。 注意:原液在-20°C稳定2周。 避光。

 

操作步骤

1.准备细菌样品,浓度为106细胞/ ml。在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。通过以10,000 x g离心10分钟除去培养基,然后将沉淀重悬于适量的PBS中。注意:在波长= 600 nm(OD600)处测量细菌培养物的光密度,以确定细胞数。对于大肠杆菌培养,OD600 = 1.0等于8 x 108细胞/ ml。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。通过以10,000 x g离心10分钟来去除处理液,然后将沉淀物重新悬浮在适量的测定缓冲液(组分B)中,以使处理后样品中的细菌浓度与活菌浓度相同。注意:开始治疗之前,请确定细菌培养物的浓度。注意:死细菌可以作为阴性对照。建议用70%乙醇杀死细菌30分钟,然后煮沸60分钟。

3.将10 µL 10X CTC储备溶液加到90 µL细菌样品中。

4.充分混合,然后在黑暗中于37°C孵育30分钟。

5.在使用流式细胞仪分析细胞之前,添加400 µL分析缓冲液(组分B)以增加体积。

6.用流式细胞仪通过PE-Taxes Red通道(Ex / Em = 488/615 nm)监测细菌的荧光。注意:要排除杂物,建议将流式细胞仪的阈值设置为以下值:FSC> 10,000,SSC> 5,000。注意:CTC的效率高度依赖菌株,因此会相应优化染色条件。

 

参考文献

Production of Superoxide in Bacteria Is Stress- and Cell State-Dependent: A Gating-Optimized Flow Cytometry Method that Minimizes ROS Measurement Artifacts with Fluorescent Dyes
Authors: M. E. McBee
Journal: Front Microbiol (2017): 459

Effect of extremely low frequency electromagnetic fields on bacterial membrane
Authors: S. Oncul
Journal: Int J Radiat Biol (2016): 42-9

Simple and rapid preparation of red fluorescence and red color S. aureus derived nanobioparticles for pathogen detection
Authors: W. Hu
Journal: J Microbiol Methods (2015): 47-53

Reduction of biofilm formation on titanium surface with ultraviolet-C pre-irradiation
Authors: Y. Yamada
Journal: J Biomater Appl (2014): 161-171

A novel staining protocol for multiparameter assessment of cell heterogeneity in Phormidium populations (cyanobacteria) employing fluorescent dyes
Authors: D. Tashyreva
Journal: PLoS One (2013): e55283

Method for the direct observation and quantification of survival of bacteria attached to negatively or positively charged surfaces in an aqueous medium
Authors: B. Asadishad
Journal: Environ Sci Technol (2011): 8345-51

Potential action of copper surfaces on meticillin-resistant Staphylococcus aureus
Authors: L. Weaver
Journal: J Appl Microbiol (2010): 2200-5

Carbonate crystals precipitated by freshwater bacteria and their use as a limestone consolidant
Authors: D. V. Zamarreno
Journal: Appl Environ Microbiol (2009): 5981-90

Effects of long-term starvation on a host bivalve (Codakia orbicularis, Lucinidae) and its symbiont population
Authors: A. Caro
Journal: Appl Environ Microbiol (2009): 3304-13

Rapid Detection of Starved Escherichia coli with Respiratory Activity in Potable Water by Signal-Amplified in situ Hybridization Following Formazan Reduction
Authors: N. Yamaguchi
Journal: Microbes Environ (2009): 286-90



说明书
MycoLight 荧光CTC活细菌定量试剂盒.pdf