MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒

货号22407存储条件f/l
规格100 Tests价格3720
Ex (nm)498Em (nm)526
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

        MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒,MycoLight流式细胞术活菌分析试剂盒提供了一种简便的方法,可根据细胞内酯酶活性评估细菌活力。 MycoLight™520是一种非荧光酯酶底物,可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。 通过细菌细胞内非特异性酯酶水解后,会产生绿色荧光产物,并在细菌内积累。 与常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比,该试剂盒可提供更明亮,更稳定的信号,具有更低的背景和更容易的染色方案。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备100X染料储备溶液。
2.准备细菌样品。
3.将细菌样品与MycoLight 520在黑暗中于37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟。
4.通过带有FITC通道的流式细胞仪分析样品。

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1MycoLight 520储备液(100X):
将100 µL DMSO(组分C)加入一小瓶MycoLight 520(组分A)中,制成100X储备液。

 

样品示例及操作

1.准备细菌样品,浓度范围为106到108个细胞/ ml。在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。通过以10,000 x g离心10分钟除去培养基,然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液(组分B)中。注意:在波长= 600 nm(OD600)处测量细菌培养物的光密度,以确定细胞数。对于大肠杆菌培养,OD600 = 1.0等于8 x 108细胞/ ml。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。通过以10,000 x g离心10分钟来去除处理液,然后将沉淀物重新悬浮在适量的测定缓冲液(组分B)中,以使处理后样品中的细菌浓度与活菌浓度相同。注意:开始治疗之前,请确定细菌培养物的浓度。注意:死细菌可以作为阴性对照,建议使用70%乙醇杀死细菌30分钟,然后煮沸60分钟。

3.活/死细菌混合物制备示例:混合7种不同比例的细菌悬液,如表1所示,每个样品的总体积为200 µL。

4.将2 µL 100X MycoLight 520储备液加到200 µL Assay Buffer中的细菌样品中。

5.充分混合并在黑暗中于37°C孵育5-10分钟,或在室温孵育60分钟,以获得最佳染色效果。

6.在使用流式细胞仪分析细胞之前,添加300 µL分析缓冲液(组分C)以增加体积。

7.用流式细胞仪通过FITC通道(488/530 nm)监测细菌的荧光。注意:要排除杂物,建议将流式细胞仪的阈值设置为以下值:FSC> 10,000,SSC> 5,000。注意:MycoLight 520的效率高度依赖菌株,因此应相应优化染色条件。

 

表1.混合以达到各种活/死比的活样本和死样本的示例体积

活细胞比例 样品死亡µL 活样品µL
0:100 0 200
10:90 20 180
30:70 60 140
50:50 100 100
90:10 180 20
100:0 200 0

 

参考文献

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说明书
MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒.pdf