MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒

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产品优势

1.信号更明亮稳定

2.背景荧光更低

3.染色流程更简便

 

产品介绍

MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒提供了一种简便可靠的方法，通过检测细菌细胞内酯酶活性来评估细菌活力。该试剂盒采用的MycoLight™ 520是一种非荧光酯酶底物，可渗透至革兰氏阳性菌与阴性菌内部，经细菌细胞内非特异性酯酶水解后生成绿色荧光产物并累积于菌体内。

与常用酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比，MycoLight 流式细胞计数活细菌检测试剂盒能提供更明亮稳定的荧光信号，同时具有背景荧光更低、染色流程更简便的优势。

样品实验方案

简要概述

1.准备100X染料储备溶液。

2.准备细菌样品。

3.将细菌样品与MycoLight 520避光于37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟。

4.通过带有FITC通道的流式细胞仪分析样品。

 

溶液配制

储备溶液配制

除非另有说明，所有储备液应分装为单次用量并于-20°C冻存，避免反复冻融。

MycoLight 520储备液（100X）：

将100 µL DMSO（组分C）加入一小瓶MycoLight 520（组分A）中，制成100X储备液。

 

样品示例及操作

1.将细菌培养至对数生长后期，浓度调整至10⁶–10⁸ cells/mL。离心去除培养基（10,000 × g，10分钟），用Assay Buffer（组分B）重悬菌体。
*注：通过OD600值换算细胞数（大肠杆菌OD600=1.0约等于8×10⁸ cells/mL）*

2.按实验需求对菌体进行化合物处理。离心去除处理液（10,000 × g，10分钟），用适量Assay Buffer（组分B）重悬菌体，确保处理组样本的细菌浓度与活菌组一致。

注1：处理前需先测定细菌培养物的浓度。

注2：死菌可作为阴性对照，建议采用70%乙醇处理30分钟后再沸水浴60分钟的方法制备

3.活/死细菌混合物制备示例：混合7种不同比例的细菌悬液，按表1所示比例混合活菌与死菌悬液，每个样本总体积为200 µL。

4.向200 µL菌悬液中加入2 µL 100X MycoLight™ 520储备液。

5.充分混匀后，避光条件下37°C孵育5-10分钟或室温孵育60分钟，以获得合适染色效果。

6.流式检测前加入300 µL Assay Buffer（组分C）扩大样本体积。

7.通过流式细胞仪FITC通道（488/530 nm）检测细菌荧光。

注1：建议设置流式细胞仪阈值以排除碎片：FSC >10,000，SSC >5,000。

注2：MycoLight™ 520的染色效率因菌株而异，需相应优化染色条件。

 

表1. 制备不同活/死菌比例样本的参考混合体积

活细胞比例	样品死亡µL	活样品µL
0:100	0	200
10:90	20	180
30:70	60	140
50:50	100	100
90:10	180	20
100:0	200	0