MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒

货号22411存储条件f/l
规格100 Tests价格4980
Ex (nm)488/540Em (nm)530/620
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

        MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细菌的试剂盒,AAT Bioquest的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒提供双色荧光检测,通过荧光显微镜观察活细菌和死细菌。MycoLight 520是一种非荧光酯酶底物,可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。在细菌细胞内非特异性酯酶水解后,产生绿色荧光产物并在细菌内积累。相比之下,碘化丙锭是一种红色荧光核酸染色剂,只能穿透受损膜的细菌。因此,使用MycoLight 520和碘化丙锭染料的适当混合物,具有完整细胞膜的活细菌发出绿色荧光,而具有受损膜的死细菌产生红色荧光。MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒是一种用于对活/死细菌进行成像的强大工具。可以在Ex / Em = 488 / 525nm(FITC滤光器组)和540 / 620nm(TRITC滤光器组)下荧光测量染色细胞,分别用于活细菌和死细菌。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒。 



产品说明书

染色样品示例

概述

1.准备100X MycoLight 520原液
2.准备细菌样本
3.加入MycoLight 520和碘化丙锭
4.将细菌样品与MycoLight 520和碘化丙啶在37°C孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟
5.用FITC和TRITC滤光片组通过荧光显微镜分析样品
注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分

操作步骤

        在没有额外说明的情况下,所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C,避免反复冻融循环。


1.MycoLight 520原液(100X):
将100μLDMSO(组分D)加入MycoLight 520(组分A)的小瓶中。
注意:将储备溶液储存在-20°C,避免光照,反复冻融。

2.制备浓度为106至108个细胞/ mL的细菌样品。 在适当的培养基中将细菌培养到对数晚期。

注意:测量波长= 600 nm(OD600)的细菌培养物的光密度以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养物,OD 600 = 1.0等于8×108个细胞/ ml。

3.通过以10,000xg离心10分钟除去培养基,并将沉淀重新悬浮在测定缓冲液(组分C)中。

4.通过用70%乙醇处理30分钟,然后煮沸60分钟,可以制备死细菌。
 
5.染色
        以下是推荐的方案,应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。 如果观察到更高的背景,可以在成像之前添加任选的洗涤步骤。
 
5.1将1μL100XMycoLight 520原液和1μL100X碘化丙啶(组分B)加入到100μL测定缓冲液中的细菌样品中。
5.2充分混合并在37℃下在黑暗中孵育5-10分钟或在室温下孵育60分钟以获得最佳染色结果。
5.3通过FITC(Ex / Em = 488 / 530nm)和TRITC(Ex / Em = 540 / 620nm)通道用荧光显微镜监测细菌的荧光。
 
染色结果
 
图1.用MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒染色活的和死的枯草芽孢杆菌的混合群体。 具有活性细胞内酯酶的活细菌显示绿色荧光,而具有受损膜的70%酒精杀死的死细菌显示红色荧光。
 
参考文献

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说明书
MycoLight 荧光活/死细菌成像试剂盒.pdf