Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒 橙色荧光

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产品优势  

1.特异性强：利用溶酶体 pH 梯度，选择性积聚在溶酶体，实现特异性染色

2.荧光特性好：信噪比高，光稳定性强，进入溶酶体后荧光显著增强

3.细胞适用性广：适用于增殖与非增殖细胞，以及悬浮细胞和贴壁细胞

 

适用范围

主要用于标记活细胞

 

产品介绍

溶酶体是一种含有酸性水解酶的细胞器，可分解废物和细胞碎片。它能消化多余或老化的细胞器、食物颗粒以及被吞噬的病毒或细菌。溶酶体膜使其内的消化酶在pH4.5环境下工作——相较于略呈碱性的细胞质（pH7.2），溶酶体内部呈酸性（pH4.5-4.8）。这种pH差异的维持依赖于溶酶体膜上的质子泵和氯离子通道持续将质子从细胞质泵入膜内。

Cell Navigator®荧光成像试剂盒是一套用于标记细胞膜、溶酶体、线粒体、细胞核等亚细胞器的荧光成像工具。这种对活细胞器的选择性标记技术，为在时空维度研究细胞活动提供了强大手段。本款试剂盒专为活细胞溶酶体设计，可标记出橙色荧光。

Cell Navigator 溶酶体标记试剂盒专为绿色荧光标记活细胞溶酶体而设计，其选择性聚集于溶酶体的机制很可能与溶酶体pH梯度相关。这种疏水性指示剂可轻松穿透活细胞膜，进入细胞后即被捕获在溶酶体内，并在溶酶体中产生显著增强的荧光。这一关键特性使其具有极低染色背景，可广泛应用于细胞粘附、趋化性、多药耐药性、细胞活力、凋亡及细胞毒性等研究领域，既适用于增殖期也适用于静止期细胞，可同时用于悬浮和贴壁细胞。

分析方案

概述

1. 准备细胞

2. 加入LysoBrite™ Orange工作液

3. 37°C孵育30分钟

4.使用荧光显微镜激发/发射 = 540/570 nm（TRITC滤光片组）观察细胞

注意：实验前需将所有试剂盒组分室温解冻。

 

工作液配制

将20 µL 500× LysoBrite™ Orange原液（组分A）加入10 mL活细胞染色缓冲液（组分B）中，充分混匀，配制成LysoBrite™ Orange工作液。避光保存。

注意：1. 20 µL 500× LysoBrite™ Orange原液（组分A）可满足一块96孔板的使用需求。

          2. 荧光溶酶体指示剂的浓度需根据具体实验调整，染色条件可依据细胞类型及探针对细胞/组织的渗透性进行优化。

细胞样本制备指南请参考：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

实验操作流程

贴壁细胞染色

1.可选择在96孔黑色壁板/透明底板中（每孔加入100 µL培养基）或于培养皿内的盖玻片上进行细胞培养（加入适量培养基）。

2.待细胞达到所需汇合度后，加入等体积LysoBrite™ Orange工作液

3.将细胞置于37°C、5% CO2培养箱中孵育30分钟。

4.用预温热（37°C）的Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HBSS）或你选择的缓冲液清洗细胞两次，然后将HBSS或培养基填充到细胞孔中。

5.使用荧光显微镜激发/发射 = 540/570 nm（TRITC滤光片组）观察细胞。

注： 若染色效果不佳，建议提高染料浓度或延长孵育时间以促进染料积累。

 

悬浮细胞染色

1.向细胞中加入等体积的 LysoBrite™ Orange 工作液。

2.将细胞置于 37°C、5% CO₂ 培养箱中孵育 30 分钟。

3.用预温至 37°C 的 Hanks 缓冲液（含 20 mM Hepes，HBSS） 或您选择的缓冲液洗涤细胞 两次，随后向细胞孔中加入 HBSS 或生长培养基。

4.使用荧光显微镜激发/发射 = 540/570 nm（TRITC滤光片组）观察细胞。

注意： 若细胞染色不足，建议 提高染料浓度 或 延长孵育时间 以增强染料积累。对于悬浮细胞，可先用 BD Cell-Tak®（BD Biosciences） 处理盖玻片使其贴附，再按贴壁细胞染色流程操作。